Гистология и жидкостная цитология

Отличия новой технологии от привычной

Жидкостная цитология шейки матки – это высокоточный метод диагностики, позволяющий получить информацию о возможности развития рака шейки матки.

Жидкостная цитология позволяет оценить здоровье клеток шейки матки в целом, а не в отдельно взятых её участках.  Использование данного метода практически исключает возможность ошибочного заключения, что часто случается при исследовании мазка привычным способом (метод Папаниколау).

Данный цитологический метод отличается от обычного цитологического исследования материала в мазках тем, что:

  1. Взятие материала для цитологического исследования проводится специальной щеточкой.
  2. Материал забирается по всей окружности шейки матки, а не только из подозрительных на патологический процесс мест, как это делается при взятии материала методом мазка. Цервикальная щеточка вводится в канал шейки матки, после чего производится 2 вращательных движения против часовой стрелки и 3 движения в противоположную сторону.
  3. Взятый образец помещается в пробирку, наполненную специальной стабилизирующей жидкостью, а не на предметное стекло. Использование раствора препятствует высыханию клеток, сохраняет их биологические свойства и увеличивает срок хранения материала до 10 дней.
  4. Позволяет определить не только наличие вируса папилломы человека, но и степень нагруженности клеток вирусом. Определение количества вируса в клетках очень важно для дальнейшего лечения и прогноза.

Заражение ВПЧ происходит при сексуальных контактах, в результате чего, основная часть населения земного шара инфицируется ВПЧ с началом половой жизни.

В группу риска по развитию рака относятся:

  • Женщины, рано начавшие половую жизнь.
  • Женщины, не имеющие постоянного полового партнера и неразборчивые в выборе полового партнера.
  • Женщины, с ослабленной иммунной системой, особенно, ВИЧ-инфицированные. Известно, что в организме обладательниц ВИЧ-инфекции поселяется больший спектр вирусов папилломы человека.
  • Женщины, регулярно употребляющие табак и курительные смеси.

Ранняя диагностика рака шейки матки методом жидкостной цитологии

Ранняя диагностика рака шейки матки методом жидкостной цитологии

Ключевые слова: рак шейки матки, жидкостная цитология, скрининг

cervical cancer, liquid-based cytology, screening

Казаишвили Т.Н.

ГБУЗ «Центр специализированных видов медицинской помощи имени В.П. Аваева» (Тверь, Россия) 170006, Россия, Тверская область, Тверь, ул. Софьи Перовской, 56 E-mail: tkaza@bk.ru

Early diagnosis of cervical cancer by liquid-based cytology

Kazaishvili T.N.

SBOH «V. Avaev Center of specialized types of medical care» (Tver, Russia) 56, ul. Sofii Perovskoy, Tver, Tverskaya oblast, 170006, Russia E-mail: tkaza@bk.ru

Резюме

Рак шейки матки – одна из наиболее распространенных онкологических патологий.

В этой статье мы сравнили два метода цитологического исследования: традиционную и жидкостную цитологию.

Метод жидкостной цитологии является более информативным и может использоваться как самостоятельный скрининговый метод выявления заболеваний шейки матки.

Abstract

Uterus cervix cancer is one of the most widespread oncological pathologies among the female population.

In this article we compared two methods of cytologic research of material from a uterus cervix: traditional and liquid cytology.

гистология и жидкостная цитология

Рак шейки матки (РШМ) занимает второе место в структуре онкологической патологии среди женского населения в мире. Ежегодно регистрируется около 500 тыс. новых случаев рака шейки матки и около 250 тыс. смертельных исходов.

За последние 10 лет заболеваемость раком шейки матки в России возросла на 26%. Показатель запущенности в 2013 г. составил 36%, то есть больше трети больных обращаются уже на III, IV стадиях, когда лечение неэффективно.

Одногодичная летальность от рака шейки матки составляет 16%.

Несмотря на визуальность формы и длительный период предрака с возможностью ранней диагностики и высокоэффективного несложного органосохраняюще-го лечения, заболевание часто диагностируется на этапе глубоко инвазивного процесса, предполагающего калечащее лечение без гарантий выздоровления.

Это свидетельствует об объективных нераскрытых трудностях диагностики, приводящих к расхождениям результатов диагностических тестов, их невысокой чувствительности и воспроизводимости.

Для максимальной оптимизации диагностики цер-викальной патологии и избежания субъективной интра-операционной оценки локализации и размеров участка неоплазии необходимо применение современных и внедрение новых уточняющих методов диагностики.

В настоящее время все большее распространение получает высокоэффективный метод жидкостной цитологии, который позволяет получить тонкий репрезентативный моно-слойный препарат с минимальным содержанием крови, бактерий и нейтрофильных лейкоцитов.

Цитограмма - норма

Влажная фиксация усиливает четкость структур, распространенные артефакты при этом отсутствуют.

онкогенной направленности от воспалительной. Чувствительность цитологического метода при применении ЖЦ возрастает до 85% и до 96% в отдельных лабораториях.

Цель исследования – совершенствование диагностики доброкачественных, предраковых заболеваний и рака шейки матки, сопоставление традиционной и жидкостной цитологии в диагностике цервикальной патологии.

За период с 2014 по 2015 гг. на базе ГБУЗ Центра им. В. П. Аваева г.

Твери было проведено 4560 исследований цервикальных образцов, параллельно традиционным методом и методом жидкостной цитологии с приготовлением и окраской цитологического препарата по методике BD Surepath c автоматизированной системой просмотра цитологических препаратов BD Focal Point GS.

Возраст пациенток составил от 18 до 65 лет. Интерпретация цитологической картины производилась согласно общепринятым критериям оценки состояния эпителия по Bethesda System,1999.

Таким образом, точность метода жидкостной цитологии существенно выше по сравнению с традиционным

методом. Метод жидкостной цитологии в скрининге рака шейки матки продемонстрировал возможность выявления патологического процесса на ранних этапах его развития, проведения мониторинга опухолевого процесса,

что определяет своевременность применения правильной тактики лечения. ЖЦ может использоваться как самостоятельный высокоинформативный скрининговый метод выявления заболеваний шейки матки.

Список литературы

2. Новик В. И. Эпидемиология рака шейки матки, факторы риска, скрининг. Практическая онкология. 2002; 3: 156-166.

3. Онкология: национальное руководство. Под ред. Чиссова В. И., Давыдова М. И. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008.

ГАЛАВИТ – иммуномодулятор с доказанным противовоспалительным действием

Подробно о Галавит для врачей

«Медицинский совет. Генекология» 2015

В.Н. Прилепская, д.м.н., профессор, Г.Р. Байрамова, д.м.н., Е.А. Коган, д.м.н., профессор, В.Ф. Чернова, А.Н. Окушко, к.м.н. Научный Центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова Минздрава России, Москва

В данном обзоре рассматривается взаимосвязь вируса папилломы человека и его роль в развитии цервикальных интраэпителиальных неоплазий (CIN) и рака шейки матки.

Представлены данные о наиболее информативных методах диагностики (иммуногистохимические, молекулярно-генетические и др.

) и лечения ВПЧ-ассоциированных поражений шейки матки.

В России в 2012 г. число новых случаев РШМ составило 15 342 (6,3%), смертность от рака шейки матки – 7 371 (5,3%) случаев [1]. В последние годы РШМ все чаще встречается в молодом возрасте.

По данным ВОЗ, заболеваемость РШМ в возрастной группе 15-39 лет в мире составила 111 503 случая, в России – 3 954, в группе 40-44 года – 66 308 и 1 564 случая соответственно [1].

По данным ряда исследований, РШМ у женщин в возрасте 30-39 лет составляет 78%, в возрасте 20-29 лет – 21% и только в 1% случаев диагностирован в возрасте моложе 20 лет [3].

Почти в 100% случаев у больных РШМ, подтвержденным гистологическим методом исследования, выявляется вирус папилломы человека (ВПЧ) высокоонкогенных типов.

По данным C.M. Wheeler и соавт. (2006) через 3 года после инфицирования ВПЧ CIN II-III развивается у каждой четвертой женщины (27%) [5]. В России папилломавирусная инфекция диагностируется у 15,5% женщин, в США – у 28,6%, в Европе – 2-12% [6].

Вирус папилломы человека – ДНК-содержащий вирус, в состав которого входят два структурных гена (L1 и L2) и семь функциональных генов (E17). Известно более 200 типов ВПЧ, более 40 из них способны поражать слизистые оболочки половых органов [7].

(2015) [8] показали, что у женщин с гистологически верифицированным диагнозом CIN 3 в 63,6% случаев выявляется ВПЧ 16 типа, в 7% – ВПЧ 33 типа, в 6,2% случаев – ВПЧ 18 типа и в 5,4% – ВПЧ 31 типа.

Вместе с тем авторы показали, что ВПЧ 16 типа чаще встречается в возрасте до 35 лет [8]. В ряде исследований показано, что в 70% случаев инвазивный РШМ обусловлен ВПЧ 16 и 18 типов [9].

Эпидемиологические и молекулярно-биологические данные указывают на важную роль вируса папилломы человека в возникновении цервикальных интраэпителиальных неоплазий и рака шейки матки. Почти в 100% случаев у больных РШМ, подтвержденным гистологическим методом исследования, выявляется вирус папилломы человека высокоонкогенных типов

Особенностью ВПЧ-инфекции является тот факт, что в силу эпителиотропности вируса он не обнаруживается в крови, а выработка антител иммунной системой отмечается далеко не у всех инфицированных больных [10].

При этом уровень антител очень низок и не способен обеспечить длительный и надежный иммунитет.

Как подготовиться к процедуре?

Получение биоматериала проводится во время осмотра пациентки в гинекологическом кресле. Щеточкой, разработанной специально для этой методики, с шейки берут материал для дальнейшего изучения.

В случае хорошего результата, который подтверждает отсутствие каких-либо заболеваний, рекомендован повторный профилактический тест через 1 год.

Полученный и стабилизированный материал исследуют с помощью специального автоматического процессора, который изготавливает препараты по установленной программе.

Необходим определенный объем образца (затем он очищается с помощью вакуумного фильтра и помещается на предметное стекло), который затем подвергается изучению.

Жидкостная цитология обеспечивает 95% чувствительность теста (цитологический анализ — до 60%).

Жидкостная цитология — что это такое? Как к ней подготовиться? Данная технология – это самый быстрый метод исследования материала, помогающий получить максимум информации, увидеть любые, даже самые незначительные отклонения в клетках шейки матки.

Прежде чем сдавать мазок, следует подготовиться. Для этого рекомендуется исключить любые сексуальные отношения за двое суток до сдачи анализа. Также нельзя проводить спринцевания, применять свечи и мази.

Рекомендуется прекратить прием контрацептивов и противовоспалительных препаратов. За пару часов до взятия мазка следует воздержаться от мочеиспускания.

Анализ не берется во время менструации, при наличии выделений, зуде, воспалении половых органов.

Техника забора мазка для исследования проста. Во время осмотра гинеколог очищает шейку матки ватным тампоном, а затем специальной щеточкой, выполняет забор материала для анализа и наносит его на стекло. Результаты обследования готовы примерно через неделю.

Цитологический мазок дает возможность определить, какой размер и форму имеют патологические клетки, их размещение. Все это помогает выявить болезни шейки матки, в числе которых раковые и предраковые недуги.

При использовании жидкостной цитологии щеточка вместе с забранными биоматериалами помещается в стабилизирующий раствор. Так клетки сохраняются длительное время, что дает возможность провести исследование и точно поставить диагноз.

Противопоказания

Назначить диагностику таким методом целесообразно при подозрении на онкологические заболевания. Процедура позволит определить наличие атипичных клеток, степень поражения.

Показания для жидкостной цитологии шейки матки:

  • планирование беременности;
  • частая смена половых партнеров;
  • нарушение менструального цикла;
  • лишний вес, диабет, метаболический синдром;
  • вирусные заболевания репродуктивной системы, в частности, ВПЧ;
  • прием противозачаточных препаратов;
  • изменение характера выделений;
  • подбор способа предохранения (противозачаточных таблеток, внутриматочной спирали).

Когда лучше делать жидкостную цитологию шейки матки? Мазок для исследования берут в период первых семи дней после менструации.

Результат исследования может быть 2 видов: отрицательный (или нормальный) — указывает на отсутствие патологических изменений и положительным (или патологическим) — в материале выявлены атипичные клетки, которые могут быть предвестниками онкологических болезней.

Противопоказания к процедуре:

  • острые инфекции органов репродуктивной системы;
  • беременность;
  • менструация.

После рождения ребенка проводить манипуляцию можно не раньше, чем по истечению 3 месяцев.

Жидкостная цитология шейки матки – это исследование, позволяющее подобрать наиболее эффективный метод лечения онкозаболевания. Данная технология позволяет определить злокачественные клетки, а также снизить степень развития рака.

Показаниями для проведения обследования являются:

  • Нарушения менструального цикла. Слишком короткие и слишком длинные менструации, задержки.
  • При планировании беременности.
  • Длительный прием гормональных препаратов.
  • Появление выделений без причины.
  • Перед установкой влагалищных средств контрацепции.
  • При вирусных генитальных патологиях.

По показаниям, врач забирает биоматериал из цервикального канала и направляет на диагностику. Для максимальной информативности материал на жидкостную цитологию лучше всего сдавать в первые десять дней после окончания месячных.

Полученный результат может быть отрицательным или положительным. Последний говорит о наличие атипичных клеток, которые могут привести к развитию онкологии.

Последствия

Анализ отличается незначительным травмированием тканей, малозаметным дискомфортом.

Рекомендации после проведенной жидкостной цитологии включают воздержание от полового акта (48 часов). При ухудшении самочувствия, сильной боли необходимо обратиться за медицинской помощью.

Жидкостная цитология шейки матки — современный способ, заключающийся в особенном сохранении взятого мазка и дальнейшем его исследовании. Методика незаменима при скрининге рака шейки матки наравне с гистологическим анализом тканей.

Новые возможности ранней диагностики и профилактики ВПЧ-ассоциированных поражений шейки матки

Для ранней диагностики CIN широко применяют цитологический метод Pap-тест и молекулярные методы выявления ДНК ВПЧ [15, 42].

Во многих странах с целью ранней диагностики и снижения заболеваемости РШМ разработаны скрининговые программы, включающие рутинное проведение цитологического метода исследования Pap-тест (тест по Папаниколау).

В настоящее время в странах Европы и США цитологическое исследование рекомендовано проводить 1 раз в 3 года, начиная с возраста 21 год или спустя 3 года от начала половой жизни [16].

2012 №572н регламентированы лишь общие положения о целесообразности проведения ежегодных профилактических осмотров женщин с цитологическим исследованием мазков с экзо- и эндоцервикса.

Диагностика ВПЧ-ассоциированных заболеваний шейки матки должна быть комплексной и базироваться на проведении ряда исследований: выявление ДНК ВПЧ с помощью реакции гибридизации вирусной ДНК с РНК-зондом (Digene-тест, Cobas HPV Test), выявление ДНК ВПЧ с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с типированием и определением количества геномных эквивалентов вируса;

цитологическое исследование (традиционная или жидкостная); определение онкопротеинов Е6 и Е7; оценка экспрессии онкопротеинов p16/Ki67 иммуноцитохимическим (ИЦХ), иммуногистохимическим (ИГХ) методами;

Однако на сегодняшний день данные о специфичности и чувствительности всех перечисленных методов неоднозначны.

Другим международным референтным тестом, который также используется для генотипирования ВПЧ, является тест-система Cobas.

Данный метод обеспечивает качественную детекцию 14 высокоонкогенных типов ВПЧ: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68, а также генотипирование ВПЧ 16 и 18 типов в этом же анализе [17]. S. Phillips и соавт.

(2015) провели сравнительный анализ ВПЧ-тестирования 407 образцов с гистологически подтвержденным диагнозом CIN различной степени тяжести на тест-системах Cobas и Digene.

Показана корреляция между степенью тяжести плоскоклеточных интраэпителиальных поражений и наличием ВПЧ высокоонкогенных типов – чувствительность тест-системы Cobas составила 90,6%, Digene-теста – 86,1%, специфичность – 92,9 и 91,8 соответственно [18].

Особенностью ВПЧ-инфекции является тот факт, что в силу эпителиотропности вируса он не обнаруживается в крови, а выработка антител иммунной системой отмечается далеко не у всех инфицированных больных. При этом уровень антител очень низок и не способен обеспечить длительный и надежный иммунитет

В нашей стране также используется метод ПЦР диагностики в режиме реального времени, который позволяет провести генотипирование и количественное определение 21 типа ВПЧ (HPV КВАНТ – 21) – 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 44, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82, 6, 11.

Метод основан на реакции амплификации, в ходе которой молекулы праймеров связываются с фрагментами ДНК вируса в образце и в среде с добавлением катализаторов, под воздействием температуры происходит образование дочерних комплементарных двухцепочечных молекул ДНК.

По данным ряда авторов, для определения дисплазии высокой степени и РШМ необходимо проводить цитологическое исследование в сочетании с тестированием на ВПЧ, чувствительность достигает более 96% [20].

В последние годы помимо традиционной цитологии активно внедряется жидкостная цитология (ЖЦ) – высокоспецифичный метод.

Известно, что пусковым моментом неопластического процесса шейки матки является интеграция ВПЧ в геном клетки-хозяина, в ходе которого нарушается считывание генов Е1 и Е2, регулирующих экспрессию онкопротеинов Е6 и Е7.

Экспрессия специфических онкобелков Е6 и Е7 является необходимым условием злокачественного роста цервикальных клеток.

Установлено, что гены Е6 вызывают деградацию белков-супрессоров генов р53 и ВАХ, предотвращают апоптоз и деградацию тирозин-киназы, активацию теломеразы и подавляют выработку интерферона [24].

Исследования ряда авторов показали, что обнаружение м-РНК, кодирующих онкопротеины Е6 и Е7 вируса папилломы человека высокого онкогенного риска, является более специфическим предиктором персистирующей инфекции, чем обнаружение ДНК ВПЧ [26, 27].

По данным F. Karlsen (2009), специфичность показателей онкопротеинов Е6 и Е7 для LSIL (низкая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения) составляет 80% [28].

Чувствительность кольпоскопии для определения субклинической ПВИ, предрака и рака шейки матки составляет 80-90%, специфичность 30-60%. К преимуществам данного метода можно отнести возможность прицельной биопсии с наиболее подозрительных участков шейки матки для дальнейшего гистологического исследования с целью подтверждения или опровержения неопластического процесса

В последние годы одним из перспективных методов диагностики ВПЧ-ассоциированных поражений шейки матки является определение экспрессии маркеров пролиферации р16 и Ki 67, которые в свою очередь позволяют определить не только наличие вирусных белков в клетке, но и степень нарушений клеточной регуляции в ответ на персистенцию вируса в клетке.

Известно, что белок р16 (INK4A) [30, 43] является продуктом гена CDKN2A и подавляет активность циклин-зависимых киназ 4 и 6, которые регулируют G1-фазу клеточного цикла.

Экспрессия этого белка в нормальных клетках ограничена, однако при ВПЧ-инфекции онкобелок Е7 связывается с белком супрессором опухолей ретинобластомой (RB), что приводит к деградации последней и, как следствие, к избыточной экспрессии р16 [25].

Выявление атипичных клеток плоского эпителия шейки матки, экспрессирующих одновременно р16 и маркер пролиферации Ki67, указывает на индуцированное дисрегулирование клеточного цикла и обеспечивает более точную диагностику поражений высокой степени тяжести.

Первые исследования по определению р16 и Ki67 показали высокую специфичность метода [31]. H. Ikenberg и соавт. (2013) провели обследование 27 349 женщин из 196 медицинских центров в возрасте от 18 до 65 лет (средний возраст 39,9±11,4 года), которым был проведен цитологический скрининг, ВПЧ-тест и определение экспрессии р16 и Ki67 иммуно-гистохимическим методом.

Пациенткам с аномальными цитологическими мазками и/или положительным ВПЧ-тестом, и/или положительной экспрессией р16 и Ki67 выполнялась расширенная кольпоскопия (n=2301) и прицельная биопсия шейки матки (по показаниям).

HSIL

Диагноз CIN2 был установлен в 205 биоптатах шейки матки. При этом окраска цитологических препаратов двойным иммуноцитохимическим методом показала наибольшую чувствительность по сравнению с мазком, окрашенным гематоксилин-эозином – 86 и 68,5% соответственно (р

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Медицинский взгляд на еду
Adblock
detector