Методы исследования в гистологии, цитологии и эмбриологии (часть 1)

4. Задачи гистологии

• изучение строения клеток, тканей и

органов;

• установление

связей

исследования цитологию и эмбриологию

между

различными


явлениями

общих

закономерностей.

• В отличие от анатомии гистология

изучает строение живой материи


на микроскопическом и электронномикроскопическом уровне.

решают

фундаментальных

теоретических проблем и прикладных

аспектов современной медицины и


биологии;

изучение закономерностей цито- и

гистогенеза, строения и функции клеток

и тканей;

выяснение роли нервной, иммунной,

эндокринной

систем


организма

регуляции

процессов

морфогенеза

клеток,

тканей,

органов

функционирование;

исследование


возрастных

изменений клеток, тканей и органов;

исследование

адаптации

клеток,

тканей и органов к действию


различных факторов;

изучение процессов системы матьплод;

исследование

эмбриогенеза

человека.

органов;


• установление

связей

между

различными

явлениями

общих

закономерностей.

решают

фундаментальных

биологии;

и тканей;

эндокринной


систем

организма

регуляции

процессов

морфогенеза

клеток,

тканей,

органов

функционирование;

исследование

возрастных

исследование

адаптации

клеток,

исследование

эмбриогенеза


человека.

51. Ядро — часть клетки, являющееся хранилищем наследственной информации

Ивановская государственная медицинская академия

Кафедра гистологии, эмбриологии и цитологии

Методы исследования в

гистологии, цитологии и

эмбриологии


Часть I

к.м.н., старший преподаватель М.Р. Гринева

д.м.н., профессор С.Ю. Виноградов

д.м.н., профессор С.В. Диндяев

далее

2. Оглавление

Введение

Методы исследования живых клеток и тканей

Виды гистологических препаратов фиксированных клеток

Изготовление гистологического препарата

Гистологический препарат

Взятие материала

Фиксация материала

Уплотнение материала


Приготовление срезов

Виды микротомов

Окрашивание срезов

Методы окрашивания

Типы красителей

Заключение срезов в консервирующую среду

Методы микроскопии

Световая микроскопия

Устройство светового микроскопа


Техника микроскопирования

Темнопольная микроскопия

Поляризационная микроскопия

Фазово-контрастная микроскопия

Флюоресцентная (люминесцентная) микроскопия

Электронная микроскопия


Рекомендуемая литература

назад

далее

1. ВВЕДЕНИЕ. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В ГИСТОЛОГИИ, ЦИТОЛОГИИ И ЭМБРИОЛОГИИ. КЛЕТОЧНАЯ ТЕОРИЯ

В современной гистологии, цитологии и эмбриологии применяются

разнообразные методы исследования, позволяющие всесторонне изучать

процессы развития, строения и функции клеток, тканей и органов.


Главными этапами цитологического и гистологического анализа являются

выбор объекта исследования

подготовка его к микроскопированию

применение методов микроскопирования

качественный и количественный анализ изображения


Объектами

исследования

служат

ГИСТОЛОГИЯ

гистологические

изготовленные из живых или фиксированных клеток.

препараты,

оглавление далее

Гистология

Гистология – («гистос» греч. – ткань,

логис — учение)

наука о строении, развитии и

жизнедеятельности тканей многоклеточных

организмов и человека. Невооруженному глазу

недоступны объекты, являющиеся предметом

этой науки. Поэтому и история гистологии

тесно связана с истроией создания таких


приборов,

которые

позволяют

изучить

мельчайшие предметы, невооруженным глазом.

Курс гистологии условно разделен на

1. Цитология — наука о клетке.

2. Эмбриология — наука о развитии, от

зарождения до полного формирования

организма.

3. Общая гистология — наука об общих


закономерностях, присущих тканям.

4. Частная гистология — изучает строение,

развитие органов и систем.

9. Взаимосвязь с другими дисциплинами

Знание гистологии необходимо для

освоения

других

фундаментальных

физиологии,


биохимии,

патофизиологии,

патанатомии

иммунологии,

микробиологии,

фармакологии


и др.

освоения

других

фундаментальных

физиологии,

биохимии,

патофизиологии,


патанатомии

иммунологии,

микробиологии,

фармакологии

и др.

• Плазмолемма (цитолемма)

• Цитоплазма (гиалоплазма,

органеллы, включения)

• Ядро

• липиды (билипидный слой) – 40%,

• белки – 50-55%,

• углеводы (гликокаликс) – 5-10%

• Функции – разграничение, рецепция,

транспорт веществ


• Транспорт: активный и пассивный,

экзоцитоз и эндоцитоз (фагоцитоз,

пиноцитоз)

• Это матрикс, внутренняя среда клетки.

• Состав: вода – 90%

• различные

белки,


нуклеиновые кислоты, полисахариды,

аминокислоты,

моносахара,

нуклеотиды,

ионы


другие

низкомолекулярные вещества, которые

образуют

коллоидную

систему

(цитозоль или цитогель)


• Обеспечивает

взаимосвязь

между

всеми компонентами клетки.

• Это непостоянные компоненты


цитоплазмы, которые могут возникать

или исчезать в различные

функциональные состояния клеток.

• трофические (белковые, углеводные,

липидные),

• секреторные (ферменты, гормоны),

• экскреторные (продукты метаболизма)

• пигментные – эндогенные


(гемоглобин, меланин, липофусцин) и

экзогенные (каротин, красители).

Изучение живых клеток и тканей позволяет получить наиболее полную

информацию об их жизнедеятельности – проследить процессы движения,

деления, разрушения, роста, дифференцировки и взаимодействия клеток,

продолжительность их клеточного цикла, реактивные изменения в ответ на

действие различных факторов.

Методы

ГИСТОЛОГИЯ

Прижизненное


в организме (in vivo)

• Вживление прозрачных камер

• Прижизненная микроскопия

• Трансплантация

Прижизненное в культуре

клеток и тканей (in vitro)

• Суспензионные культуры

• Монослойные культуры

• Культивирование in vivo


назад

оглавление далее

• тонкие (толщина

более 1 мкм)

гистология, цитология и эмбриология

• полутонкие

(толщина менее

1 мкм)

• ультратонкие


(толщина менее

0,1 мкм)

Мазок

• крови

• красного

костного

мозга

• спинномозговой

жидкости


• слюны

• влагалищный

• и др.

Отпечаток

селезенки

тимуса


печени

слизистой

оболочки

мочевого

пузыря

• слизистой


оболочки

щеки

ГИСТОЛОГИЯ

• и др.

назад

Пленка


• брюшины

• плевры

• мягкой мозговой

оболочки

• соединительной

ткани


• и др.

оглавление далее

оглавление далее

Гистологические препараты, как правило, представляют собой срезы (толщиной

5-15 мкм) органов, тканей или клеток, окрашенные специальными гистологическими

красителями.

сохранять прижизненное состояние структур;

быть достаточно тонким и прозрачным для изучения его под


микроскопом в проходящем свете;

быть контрастным, то есть изучаемые структуры должны под

микроскопом четко определяться;

препараты для световой микроскопии должны долго сохраняться и

ГИСТОЛОГИЯ

использоваться для повторного изучения.

Процесс изготовления гистологического препарата включает включает следующие

1. Взятие и фиксация материала

2. Уплотнение материала

3. Приготовление срезов


4. Окрашивание срезов

5. Заключение срезов в прозрачную среду

назад оглавление далее

ЦИТОЛОГИЯ – (греч. κύτος «клетка»

и λόγος — «учение», «наука»)

Раздел биологии, изучающий

живые клетки, их органоиды, их строение,

функционирование, процессы клеточного


размножения, старения и смерти.

1.Световая микроскопия.

2.Ультрафиолетовая микроскопия.

3.Флюоресцентная (люминесцентная)

микроскопия.

4.Фазово-контрастная микроскопия.

5.Микроскопия в темном

поле.


6. Интерференционная микроскопия

7. Поляризационная микроскопия.

8. Электронная микроскопия.

формалин, спирты, глутаральдегид — Наиболее распространённые

фиксаторы;

Криофиксация — Лучшую сохранность структур


обеспечивает мгновенное замораживание образцов в

жидком азоте (–196 °С);

Лиофилизация – небольшие кусочки ткани подвергаются быстрому

замораживанию, прекращающему метаболические процессы.

Обезвоживание- стандартная процедура удаления воды-обезвоживание


в спиртах, возрастающей крепости (от 70 до 60%).

Заливка – делает ткань прочной, предотвращает её раздаваливание и

сминание при резании, дает возможность получать срезы стандартной

толщины. Наиболее распространенная среда для заливки – парафин.

Используют также – целлоидин, пластически среды и смолы.

ОКСИФИЛИЯ способность

окрашиваться

кислыми


красителями в

розовый цвет

Базофилия способность

окрашиваться

основными красителями

в синий цвет


Нейтрофилия –

способность

окрашиваться кислыми и

в фиолетовый цвет.

— это элементарная живая система,

состоящая из цитоплазмы, ядра, оболочки

и являющаяся основой развития, строения

и жизнедеятельности животных и


растительных организмов.

• Ядро

• белки – 50-55%,

транспорт веществ

пиноцитоз)

• различные

белки,

Задачи гистологии

аминокислоты,

моносахара,


нуклеотиды,

ионы

другие

образуют

коллоидную

систему

Цитология

• Обеспечивает

взаимосвязь


между

липидные),

10. Значение гистологии, цитологии и эмбриологии

• Данные гистологических и

цитологических исследований широко

используются в клинической

диагностике различных заболеваний

(благодаря эндоскопии и др. приемов,

позволяющих получить материал для

исследований практически из любого


участка тела.)

участка тела.)

13. Методы микроскопирования

фазово-контрастная микроскопия

(окрашивание)

Поляризационная – модификация

светового с применением фильтров

электронная микроскопия – высокая


разрешающая способность (расстояние

0,1-0,7 нм) (трансмиссионная и

сканирующая) ТЭМ – плоское

изображение, СЭМ – объемное.

1. Микроскопирование гистологического препарата начинают с установки правильного

освещения. Для этого с помощью вогнутого зеркала, собирающего рассеянный пучок


света, и конденсора достигают равномерного освещения поля зрения.

2. На предметный столик помещают гистологический препарат покровным стеклом вверх.

3. Изучение гистологического препарата начинают при малом увеличении (объектив х8), при

этом расстояние между объективом и покровным стеклом должно быть около 1 см.

Установку резкости проводят с помощью макровинта.

4. Рассматривают детали гистологического препарата по всей площади, перемещая его на

Эмбриология

предметном столике.

5. Устанавливают в центр поля зрения участок гистологического препарата, который следует


изучить при большом увеличении (объектив х40).

6. С помощью револьверного устройства ставят объектив с более сильным увеличением

(х40). Установку резкости проводят с помощью микровинта.

7. Для изучения очень мелких гистологических структур используют иммерсионный

объектив (х90).


• На покровное стекло препарата наносят каплю иммерсионного масла.

• Осторожно опускают тубус до соприкосновения линзы объектива к маслу.

Установку резкости проводят с помощью микровинта.

• После окончания работы иммерсионное масло удаляют с объектива и покровного

стекла марлей.

Почка.

Окраска: гематоксилин-эозин.

Увеличение: х 56

(малое увеличение).

Почка.

Увеличение: х 280

(большое увеличение).

Почка.


Увеличение: х 630

назад

(иммерсионное

увеличение).

оглавление далее


микроскопия.

поле.

— фазовоконтрастный микроскоп — (для изуч. живых

неокраш-х обьектов)- микроскопия позволяет изучать живые и

неокрашенные объекты. При прохождении света через окрашенные объекты

изменяется амплитуда световой волны, а при прохождении света через


неокрашенные – фаза световой волны, что и используют для получения

высококонтрастного изображения в фазово-контрастной и

интерференционной микроскопии.

— темнопольный микроскоп (для изуч. живых неокраш-х обьектов).

Используют специальный конденсор, выделяющий контрастирующие

структуры неокрашенного материала. Темнопольная микроскопия

позволяет наблюдать живые объекты. Наблюдаемый объект выглядит как

Задачи гистологии, цитологии и эмбриологии


освещённый на тёмном поле. При этом лучи от осветителя падают на объект

сбоку, а в линзы микроскопа поступают только рассеянные лучи.

люминесцентный мик-п (для изуч. живых неокраш-х обьектов)

микроскопия применяется для наблюдения флюоресцирующих

(люминесцирующих) объектов. В люминесцентном микроскопе свет от


мощного источника проходит через два фильтра. Один фильтр задерживает

свет перед образцом и пропускает свет длины волны, возбуждающей

флюоресценцию образца. Другой фильтр пропускает свет длины волны,

излучаемой флюоресцирующим объектом. Таким образом,

флюоресцирующие объекты поглощают свет одной длины волны и

излучают в другой области спектра.

-ультрафиолетовый

способность м-па)


мик-п (повышает разрешающую

-поляризационный мик-п (для иссл. обьектов с упорядочонным

располажением молекул — скелет. муск-ра, коллагеновые волокна и т.д.) микроскопия – формирование изображения неокрашенных анизотропных

структур (например, коллагеновые волокна и миофибриллы).

-интерфекренционная микроскопия (для опред-я сухового

остатка в клетках, определение толщины обьектов) — микроскопия

объединяет принципы фазово-контрастной и поляризационной

микроскопии и применяется для получения контрастного

изображения неокрашенных объектов. Специальная


интерференционная оптика (оптика Номарского) нашла применение

в микроскопах с дифференциальным интерференционным

контрастом.

-трансмиционная (изучение обьектов на просвет)

-сканирующий (изучение поверхности обьектов)

Теоретически разрешение просвечивающего ЭМ составляет 0,002


нм. Реальное разрешение современных микроскопов приближается

к 0,1 нм. Для биологических объектов разрешение ЭМ на практике

составляет 2 нм.

Просвечивающий электронный микроскоп состоит из

колонны, через которую в вакууме проходят электроны, излучаемые

катодной нитью. Пучок электронов, фокусируемый кольцевыми

Задачи гистологии, цитологии и эмбриологии

магнитами, проходит через подготовленный образец. Характер

рассеивания электронов зависит от плотности образца. Проходящие

через образец электроны фокусируют, наблюдают на


флюоресцирующем экране и регистрируют при помощи

фотопластинки.

Сканирующий электронный микроскоп применяют для

получения трёхмерного изображения поверхности исследуемого объекта.

Метод сколов (замораживание-скалывание) применяют для изучения

Взаимосвязь с другими дисциплинами

внутреннего строения клеточных мембран. Клетки замораживают при

температуре жидкого азота в присутствии криопротектора и


используют для изготовления сколов. Плоскости скола проходят через

гидрофобную середину двойного слоя липидов. Обнажённую

внутреннюю поверхность мембран оттеняют платиной, полученные

реплики изучают в сканирующем ЭМ.

Эл. микроскопия

(окрашивание)

15. Методы гистологического и цитологического исследования

• Изготовление гистологических

препаратов (мазков, отпечатков, срезов)

• Метод вживления прозрачных камер

• Метод трансплантации клеток крови и

костного мозга от здоровых людей – доноров

людям-реципиентам, подвергнутым

смертельному облучению.

• Витальное и суправитальное окрашивание


• Исследование живых клеток в культуре

(гибридизация клеток)

• Цито- и гистохимические методы

(электоронная гистохимия)

• Метод радиоавтографии – позволяет

изучить более полно обмен веществ в разных

Значение гистологии, цитологии и эмбриологии

структурах. При этом вводят вещество с

меченными радиоактивными изотопами.

• Методы иммунофлюоросцентного анализа


(применение антител)

• Методы фракцинирования клеточного

содержимого (ультрацетрифугирование,

хроматография, электорофорез)

• Цитоспектрофотометрия

• Цитоспектрофлюорометрия


• Интерферометрия

• Морфомерия

• Автоматические системы обработки

• Интерферометрия

• Морфомерия

8. Взятие материала

Изготовление гистологического препарата производится из органов и тканей,

биопсия (пунктат),

операционным путем,


секционный (трупный) материал,

экспериментальный

1. Забор материала должен проводиться как можно раньше после смерти

или забоя экспериментального животного, а при возможности от живого

объекта (биопсия), чтобы лучше сохранились структуры клетки, ткани или

органа.

2. Забор кусочков должен производиться острым инструментом, чтобы не


травмировать ткани.

3. Толщина кусочка не должна превышать 5 мм, чтобы фиксирующий

раствор мог проникнуть в толщу кусочка.

4. Обязательно

производится

маркировка

кусочка

Методы исследования


(указывается

наименование органа, номер животного или фамилия человека, дата

забора и так далее).

Цель фиксации материала – сохранение прижизненного морфологию

клеток и тканей, предотвращение аутолиза и посмертных изменений.

Фиксатор вызывает денатурацию белка и стабилизацию липидов и тем

самым приостанавливает обменные процессы и сохраняет структуры в их


прижизненном состоянии.

Фиксация достигается чаще всего погружением кусочка в фиксирующие

жидкости, которые могут быть простыми (формалин, спирты, глутаровый

альдегид, ацетон) и сложными (раствор Карнуа, фиксатор Ценкера и др.).

Фиксация может достигаться также замораживанием (охлаждением в струе


СО2, жидким азотом и др.).

Подбор фиксаторов и продолжительность фиксации индивидуален для

различных органов и тканей и обычно колеблется от 2 до 24 часов.

Целью этого этапа является придание исследуемому материалу такой

плотности, которая позволит получить тонкие срезы необходимой толщины.

Замораживание образца с последующей резкой на замораживающем

микротоме.

Пропитывание уплотняющими средами (парафин, эпоксидные смолы и др.)


Промывка материала проточной водопроводной водой для удаления

фиксатора.

Обезвоживание (дегидратация) материала в спиртах увеличива-ющейся

концентрации (70, 80, 90, 96, абсолютный – 100%).

Удаление спирта и подготовка материала к пропитыванию парафином

обработкой растворителями парафина (ксилол и др.) и смесью парафина и

ксилола (при температуре 37°С)

Заливка в чистый расплавленный парафин (при температуре 56°С).

Охлаждение парафина и формирование блоков.

Фиксация сохраняет структуру клеток, тканей и

органов, предотвращает их бактериальное

загрязнение и ферментное

переваривание, стабилизирует макромолекулы

путём их химического сшивания.

18. История развития гистологии как науки

• Успехи гистологии как науки о строении

и происхождении тканей связаны с


развитием техники, оптики и методов

микроскопирования.

• Микроскопические методы

исследования позволили накопить

данные по тонкому строению организма


и на этом основании сделать

теоретические обобщения.

• В истории учения о тканях и

микроскопическом строении органов следует

• Домикроскопический (продолжительностью

около 2000 лет). Самый продолжительный.

• Микроскопический (около 300 лет) – с 1665


• Современный (с середины ХХ столения) сочетающий достижения в области

электоронной микроскопии,

иммунноцитохимии, цитофотометрии и др.

микроскопирования.

14. Методы окрашивания

Для изготовления тонких срезов заданной толщины в настоящее время

используются специальные приборы – микротомы (для световой микроскопии)


и ультрамикротомы (для электронной микроскопии).

3-8 мкм из материала, залитого в парафин,

10-25 мкм из материала, замороженного в камере микротома-криостата

0,08-0,1 мкм из материала, подготовленного для электронной микроскопии

Полученные срезы помещают на предметные стекла (для световой

микроскопии) или монтируются на специальные сеточки (для электронной

микроскопии).

Клеточные


структуры

специальной

обработки,

правило,

различимы даже при большом увеличении микроскопа. Они бесцветны и

Методы исследования

прозрачны.


Для выявления тканевых компонентов, отдельных клеток, внутриклеточных

структур используют красители – вещества с высоким сродством к различным

компонентам ткани и с определенными цветооптическими свойствами.

Способность тканевых компонентов по-разному окрашиваться зависит от

кислотно-основных (щелочных) свойств веществ, входящих в их состав.

Перед окрашиванием срезы депарафинируют, проводя последовательно

через растворитель парафина (ксилол), спирты нисходящей концентрации (100,


96, 90, 80, 70%) и помещают в воду.

Общегистологические

Специальные

Гистохимические

выявление

общего плана

строения


клеток, тканей,

органов

выявление

специализированных

структур в

клетках и

тканях


анализ

химического

состава клеток

межклеточного

вещества


назад

Импрегнация

Методы микроскопирования

выявление

специализированных

структур в

клетках и

тканях

оглавление

далее

Окрашенные гистологические препараты обезвоживаются в спиртах

восходящей концентрации (70, 80, 90, 96, абсолютный – 100%) и

просветвляются в ксилоле, бензоле, толуоле или некоторых маслах.

Для длительного хранения обезвоженный гистологический срез заключают

(монтируют) в прозрачную консервирующую среду (смолу хвойных деревьев –

канадский, пихтовый бальзам, а также в синтетические среды).

На постоянном гистологическом препарате срез ткани располагается на


предметном стекле, сверху закрыт покровным стеклом. Между стеклами

(предметным и покровным) находится заливочная среда, обладающая

коэффициентом преломления световых лучей, близким к таковому у стекла.

гематоксилин – окрашивает

ядра в синий цвет;

Методы гистологического и цитологического исследования

железный гематоксилин;


азур II (в фиолетовый);

кармин (в красный);

сафранин (в красный);

метиловый синий (в синий);

толуидиновый (в синий);


тиониновый (в синий).

Цитоплазматические-

эозин – в розовый;

эритрозин;

оранжевый «G»;

кислый фуксин –в красный;

пикриновая кислота — в

желтый;


конго –красный – в красный

Судан III –окраска липидов и жиров в

оранжевый цвет;

осмиевая кислота – окраска липидов и

жиров в черный цвет;

орсеин -окраска эластических волокон

в коричневый цвет;

азотнокислое серебро – импрегнация

нервных элементов в темнокоричневый цвет.

32. Современный период

• С IV в. до н.э. и до середины XVII в., является

пред историей гистологической науки,

основанной на макроскопической технике.

• Этот период связан с именами Аристотеля,

Галена, Авиценны, Везалия, Фалоппия.

• В этот период создавались общие

представления о тканях, как об


«однородных» частях организма,

отличающиеся друг от друга физическими

свойствами (твердые, мягкие), удельным

весом (тонущие в воде, не тонущие) и пр.

• Представления складывались на

основании анатомического расчленения


трупов,

• все классификации тканей строились

на их внешнем сходстве и различиях;

• Ошибочно в одну группу попадали

иногда такие различные ткани, как

нервная и соединительная (нерв,

Методы гистологического и цитологического исследования

сухожилие).

• Начался, когда английский физик Р.Гук

усовершенствовал микроскоп (1665).

• Предполагают, что первые микроскопы были

изобретены в начале 17 в.

• Р. Гук использовал микроскоп для системного

исследования различных объектов,

результаты своих исследований он

опубликовал в книге «Микрография» (1665).

Он впервые ввел термин «клетка»


(«целлюля»).

• С этого времени усилилась разработка

технических методов исследования.

• В этот период «зуд познания», по

выражению М. Мальпиги и «желание

постичь дела творца» (Н. Грю)

побуждали многих исследователей к


микроскопическим исследованиям.

• Ян Пуркинье описал наличие в

животной клетке «протоплазмы» и ядра.

• Р. Броун подтвердил наличие ядер и

большинстве животных и растительных

клеток.

• Ботаник М. Шлейден заинтересовался


происхождением клеток –

цитогенезисом.

• Дальнейшее совершенствование

микроскопов позволило выявить еще

• Клеточный центр Гартвига (1875);

• Пластинчатый комплекс Гольджи


(1898);

• Митоходрии Бенда (1898) и т.д.

• С сер. XIX в. – бурное развитие описательной

гистологии

• Изучены различные органы и ткани, их

развитие

• Уточнена классификация тканей


• Развитие гистологической техники и методов

микроскопирования (водные и масляные

объективы, микротом, фиксаторы,

окрашивание)

• К. Гольджи и Р. Кахаль – в 1906 г.

Методы гистологического и цитологического исследования

Нобелевская премия за открытие органелл

• начинается с 1950 г. – с момента

использования электронного микроскопа

(хотя электронный микроскоп был изобретен


в 1931 г. Е. Реска, М. Кноль).

• характерно использование новейших

• — цито- и гистохимии;

• — гисторадиографии и др. методов;

История развития гистологии как науки

• — используются автоматизированные методы

обработки полученной информации с


использованием компьютера.

трупов,

сухожилие).

(«целлюля»).

клеток.

цитогенезисом.

(1898);


гистологии

развитие

окрашивание)

40. Ротационный микротом.

санный

ротационный


криостатный

замораживающий

для экспрессдиагностики,

гистохимии

вибротом

изготовление

парафиновых

срезов

изготовление


серийных

парафиновых

срезов

изготовление

срезов при


температуре

История развития гистологии как науки

-20°С и ниже

для гистохимии

и иммуноцитохимии

изготовление

срезов фиксированных и

нефиксированных тканей

Блоки, содержащие

кусочек органа, закрепляют

в подвижном

объектодержателе. При

его опускании на ноже


остаются серийные срезы,

их снимают с ножа и

монтируют на предметное

стекло для последующей

обработки и

микроскопирования.

МИКРОТОМ РОТАЦИОННЫЙ

15. Импрегнация

Метод выявления тканевых структур путем пропитывания объектов


гистологического исследования растворами солей тяжелых и драгоценных

металлов (например, азотнокислое серебро (серебрение), кобальт, хлористое

золото (золочение), кадмий, осмиевым ангидрид и др. ).

Участки ткани, в которых происходит осаждение солей металлов на

гистологических структурах, приобретают черный или бурый цвет в

зависимости от количества и свойств восстановленного металла.

Периферический нерв

(поперечный срез).


Импрегнация оксидом

осмия

Мультиполярный нейрон.

Импрегнация нитратом серебра

Домикроскопический период

Мультиполярные нейроны.

16. Типы общегистологических красителей

основные

основания,

связываясь с

кислотными


соединениями

гистологических

структур, вызывают

обычно их

окрашивание в синефиолетовые цвета

базофилия

метахромазия


нейтральные

кислые

содержат как

основные, так и

кислые красящие

компоненты

Домикроскопический период


соединяясь с

основными

(щелочными)

соединениями

гистологических


структур,

окрашивают их в

цвета красителя

нейтрофилия

оксифилия

назад

оглавление далее

17. Базофилия

Основные (щелочные) красители активно связываются со структурами, которые

содержат кислоты и несут отрицательный заряд – например, ДНК, РНК.

К ним, в частности, относятся гематоксилин, толуидиновый синий, тионин,

метиленовый синий, азуры и др.

Способность окрашиваться основными (щелочными) красителями называется

базофилией (от греч. basis – основа и philia – любовь).

Поэтому структуры, связывающие эти красители, называются базофильными.

В клетке базофилией обладает ядро (вследствие высокого содержания ДНК и РНК),


иногда цитоплазма (при высоком содержании в ней рибосом или гранулярной ЭПС).

Базофильно может окрашиваться межклеточное вещество некоторых тканей – например,

хрящевой.

Базофилия ядра

нейтрофильного гранулоцита.

Окраска по Романовскому-Гимзе.

Увеличение: х630.

назад


оглавление далее

18. Метахромазия

Метахромазия (от греч. meta – изменение и chroma – цвет, краска) – изменение цвета

некоторых основных красителей при их связывании со структурами, обладающими

специфическими химическими свойствами (обычно высокой концентрацией

сульфатированных гликозаминогликанов).


К таким красителям относятся толуидиновый синий, азур II, тионин и др.

Микроскопический период

Способность метахроматически окрашиваться обладают гранулы базофильных

лейкоцитов, тучных клеток.

Указанные красители окрашивают другие базофильные структуры в тех же тканях в

обычный свойственный им цвет, т.е. ортохроматически (от греч. orthos – правильный и

chroma – краска).

Микроскопический период

Метахромазия зернистости


базофильного гранулоцита.

Увеличение: х630.

19. Оксифилия

Кислые красители связываются со структурами, имеющими положительный заряд –

например, белки.

К таким красителям относятся эозин, оранж G, эритрозин, пикриновая кислота и др.


Способность окрашиваться кислыми красителями называется оксифилией, или

ацидофилией (от греч. oxys или лат. acidus – кислый и греч. philia – любовь).

Структуры, связывающие

ацидофильными.

красители,

называются

оксифильными

Оксифилия свойственна цитоплазме клеток (особенно при высоком содержании в


ней митохондрий и некоторых белковых секреторных гранул), эритроцитам (благодаря

высокой концентрации в них гемоглобина). Оксифильно окрашивается цитоплазма

кардиомиоцитов, мышечных волокон скелетной мускулатуры, некоторые компоненты

межклеточного вещества (например, коллагеновые волокна).

Оксифилия зернистости

эозинофильного гранулоцита.


Увеличение: х630.

назад

оглавление далее

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Медицинский взгляд на еду
Adblock
detector