Окраска цитологических препаратов

1) Вида и состава красителя;

2) Концентрации красителя, которая не всегда определяет красящую способность;

3) Продолжительность окраски;

4) Возраста окрашиваемого препарата. Препараты от 6 часов и до нескольких дней давности в большинстве случаев теряют мелкие структуpные тонкости;

5) pH среды оказывает сильное влияние на окрашиваемость и тон окраски. По-видимому безразлично каким способом добавляют pH-ионы, важна лишь их концентрация;

6) Не обнаружено никаких различий окрашиваемости от температуры холодильника до комнатной температуры.

Окраска гематоксилин-эозином, ускоренная методика.

Отечественными цитологами (А. В. Руденко
и Л. К. Куница)  предложены модификации метода, в которых компоненты заменены на более доступные (например, светлый зеленый заменен на  бриллиантовый зеленый).

При окраске по Папаниколау в модификации А. В. Руденко и Л. К. Куницы мазки вначале окрашивают гематоксилином, хорошие результаты получены при использовании гематоксилина Бемера.

Мазки крови, высушенные на воздухе, окрашиваются специальными красителями с целью идентификации цитоморфологически важных структур в клетках крови.

    Кислые вещества клетки (выглядят базофильными) связывают основные красители.

Основные клеточные субстанции (ацидофильные) окрашиваются кислыми красками.

Нейтральные компоненты клетки визуализируются при помощи нейтральных растворов-красителей.

Краситель состоит из щелочной части (азур II — ярко-синий цвет), и кислой части (эозин — розово-красный цвет).

В настоящее время используется готовый краситель Романовского-Гимзе, из которого перед началом работы готовят рабочий раствор из расчета 1 капля краски на 1 мл дистиллированной воды.

Высохший фиксированный мазок помещается в кювету с рабочим раствором краски на 25-40 минут (конкретное время устанавливается опытным путем для каждой партии красителя).

    Ядра клеток — красно-фиолетовые; Эозинофильные гранулы — красновато-коричневые; Базофильные гранулы — синие; Нейтрофильные гранулы — фиолетовые; Цитоплазма лимфоцитов — голубая; Эритроциты — бледно-красные; Тромбоциты — наружная часть синяя (более светлая); внутренняя — фиолетовая (более темная).

Данный метод очень удобен для визуализации гранулоцитов.

Для окрашивания применяется готовый раствор эозинметиленового синего по Маю-Грюнвальду. Мазок без предварительной фиксации заливают красителем, через 5 минут промывают и высушивают.

    Лимфоциты — ядра: сине-фиолетовые; цитоплазма: голубая; Моноциты — ядра: сине-фиолетовые; цитоплазма: серо-голубая; Гранулоциты — ядра: сине-фиолетовые; гранулы: красные, фиолетовые, темно-синие (зависит от типа); Тромбоциты — наружная часть голубая; внутренняя — фиолетовая; Эритроциты — розовые.

Представляет собой комбинацию двух предыдущих методов.

Сухие нефиксированные мазки помещаются в кювету с раствором Мая-Грюнвальда на 3..5 минут. После этого контейнер с мазками ополаскивается дистиллированной водой, после чего мазки помещаются в кювету с разведенным раствором Романовского-Гимзы на 20..30 минут. После этого мазки промываются проточной водой и высушиваются.

    Ядра клеток — красно-фиолетовые; Цитоплазма лимфоидных клеток — светло-синяя; Лимфоидная азурная грануляция — ярко-синяя; Миелоидная азурная грануляция — фиолетовая; Нейтрофильные гранулы — светло-фиолетовые; Эозинофильные гранулы — красные, красно-коричневые; Базофильные гранулы — темно-фиолетовые, черные; Эритроциты — розовые (полихроматофильные эритроциты — синеватые); Тельца Жолли — красновато-фиолетовые; Тельца Ауэра — ярко-красные.
ПОДРОБНЕЕ:   Цитология и биопсия разные

Окраска по Райту

На сухой нефиксированный мазок наносится 1 мл красителя, через 1 минуту добавляется 1 мл дистиллированной воды. Через 2..3 минуты промывают в дистиллированной воде и высушивают на воздухе. Окраска аналогична предыдущему методу.

В красящих смесях Романовского и сходных с ним прописей Гимзы, Райта, Лейшмана в качестве ядерных краси телей используют тиазины. В их ряду — тионин-анилиновый краситель и его моно-, ди-, три — и тетраметилпроизводные азур С, азур А и азур В, метиленовый синий — широко применяются в цитологических исследованиях как ценные ядерные красители со свойством метахромазии для эксфолиативной и пункционной цитологии, для клеток крови, костного мозга, окрашивания бактерий.

Сочетание тиазинов с красителями эозиновой группы дает известную много вариантность методов. Красители типа Романовского, названные по именам авторов, которые стремились добиться стабильности состава тиазинов (Гимза, Лейшман, Дженнер, Май-Грюнвальд, Мак Нил, Райт и др.), в принципе дают сходные результаты окрашивания.

Результаты окрашивания мазков крови: цитоплазма лимфоцитов окрашивается в светло-синий цвет, их ядра — в цвета от интенсивно пурпурного до фиолетового, ядра моноцитов в более светлый пурпурно-красный, их цитоплазма в мутный голубовато-серый, грануломеры тромбоцитов в красный, гиаломеры — в голубой, гранулы базофилов — в интенсивный сине-фиолетовый цвет, гранулы эозинофилов — в оранжево-розовый, а нейтрофильных лейкоцитов — в цвета от пурпурного до фиолетового.

Референтным признается метод Романовского, состоящий из азура В и эозина Y.

Азур-эозиновые красители позволяют четко определять ранние некробиотические изменения в клетках, поскольку обычный светло-голубой оттенок цитоплазмы резко меняется на светло-розовый.

В синий цвет обычно окрашиваются ядра, бактерии, риккетсии, тигроид и рибонуклеопротеиды, в голубовато-фиолетовый — гранулы тучных клеток и базофилов, цитоплазма зрелых клеток — от голубого до фиолетового и бледно-лилового цвета.

цитоплазма клеток в состоянии некроза и некробиоза — ярко-розовая, секреторные гранулы ацинарных клеток (под желудочной железы, слюнных желез) от розового до красного.

Амилоид, фибрин окрашиваются в розовый цвет, цитоплазма мышечных волокон, коллоид щитовидной железы — в серовато-синий, кератин — ярко-голубой. Эритроциты оранжево-красного цвета.

Окраска мазков по Wright-Giemsa (№ 9990710)

На основе эозинатов полихромного метиленового синего

1. Погрузить предметные стекла в раствор красителя Райт-Гимза на выбранное время (примерно 60 секунд). Не взбалтывать краситель!

ПОДРОБНЕЕ:   Мазок на цитологию: что показывает, расшифровка анализа

2. Осушить или промокнуть свободную часть предметного стекла (или стеклодержатель), чтобы удалить избы ток краски.

3. Погрузить предметное стекло в буферный раствор примерно на то же самое время, что и время в красителе (60 секунд). Увеличение или уменьшение времени пребывания мазка в краске или буфере будет менять окончательный цвет препарата.

4. Осушить или промокнуть свободную часть препарата (или стеклодержатель), чтобы удалить избыток бу фера.

5. Погрузить мазок в раствор очистителя на 2-10 секунд, быстро взбалтывая.

6. Протереть обратную сторону стекла.

7. Высушить окрашенный мазок в вертикальном положении, поставив на адсорбирующую поверхность (напри мер, на фильтровальную бумагу). Не промокать мазок!

8. Нанести каплю масла и исследовать мазок под микроскопом. Результаты: как при окрашивании по Романовскому.

Ускоренный метод Giemsa-Kwik-Diff (№9990700)

Приготовленный мазок высушивают.

Готовят 3 контейнера (сосуды Коплина или кюветы). Наполняют Kwik-Diff раствором № 1 (фиксатор), второй сосуд — раствором № 2, третий — раствором № 3.

1. Погрузить стекла или держатели со стеклами 5 раз (1 секунда на погружение).

2. Дать стечь раствору в сосуд, обсушить край стекла.

3. Погрузить стекла или держатели стекол в раствор № 2,5 раз (одно погружение — 1 секунда). Дать жидкости стечь, обсушить край.

4. Погрузить стекла или держатель со стеклами в раствор № 3 — 5 раз (одно погружение — 1 с). Дать жидкости стечь, обсушить край фильтровальной бумагой.

5. Промыть стекло или держатель со стеклами путем погружения и покачивания в дистиллированной или де-ионизированной воде.6. Высушить на воздухе или использовать теплый воздух сушилки.

Окрашивание мазков гематоксилином-эозином

Могут использоваться различные виды гематоксилинов: Gill, Harris, кислый и неподкисленный.

1. Фиксация мазков в спирте-эфире или 96% этаноле.

2. Окрашивание в гематоксилине Gill 2 (№ 6765007) — 3-5 минут.

3. Промывание в проточной воде 1-2 минуты.

4. Окрашивание в 0,3% спиртовом растворе эозина Y (Instant, Eosin № 6765040) — 1 минуту.

5. Для сохранения микропрепарата рекомендуется заключение в бальзам после обезвоживания в спиртах. Результаты: ядра клеток — сине-фиолетового цвета, цитоплазма, мышечные волокна — различные оттенки розового цвета, муцины — светло-розового, кератогиалины — ярко-розового цвета.

Окрашивание мазков по Граму для выявления бактериальной флоры

1. Фиксация в пламени горелки мазком вниз при круговых движениях — 3 раза. Остудить.

2. Накрыть покровным стеклом с красителем кристаллическим фиолетовым Грама (№ 9990725) — 1 мин.

3. Промыть стекло до чистой промывной воды деионизированной или водопроводной водой.

4. Накрыть покровным стеклом с красителем йодным реагентом по Граму (№ 9990726) — 1 мин.

ПОДРОБНЕЕ:   Атипичные клетки в цитологии шейки матки это рак

5. Осторожно промыть стекло деионизированной или водопроводной водой. Дать стечь.

6. Промыть стекло с обесцвечивающим раствором (№ 9990727) до потери окрашивания.

7. Осторожно промыть стекло деионизированной или водопроводной водой 5—10 с.

8. Накрыть покровным стеклом с красителем Safranin О (№ 9990728), подкрашивать 1 мин.

9. Осторожно промыть стекло деионизированной или водопроводной водой 5—10 с до чистого цвета воды.

10. Дать раствору стечь и высушить на воздухе. Можно осторожно промокнуть фильтровальной бумагой.

11. Исследовать с иммерсией.

Результаты: бактерии темно-фиолетового цвета — грамположительны. Бактерии грам-отрицательные окрашены в розово-красный цвет. Контролем качества окрашивания мазка является сине-фиолетовый цвет ядер лейкоцитов и эпителиальных клеток.

Молекулярно-биологические методы выявления вируса папилломы человека

Тонкослойные препараты — Cytospins — полученные на основе жидкостной цитологии, позволяют внедрить но вые методы для микроскопической диагностики, в частности, иммуноцитохимические, для выявления микроорганизмов в мазках из шейки матки.

Выявление группы риска при исследовании цервикальных мазков и дальнейший мониторинг позволяют уловить процесс озлокачествления на самых ранних стадиях и получить лучшие результаты лечения, а обнаружение HPV при пограничных и неясных изменениях эпителия шейки матки — выбрать адекватную тактику ведения больных.

Для выявления вируса папилломы человека фирма ЛабМетод предлагает ряд методов.

Метод обеспечивает выявление возбудителя внутри клеток. В основе метода лежит специфическое взаимодействие антигена и антитела. Предлагается широкая панель антител как для скрининга на вирус папилломы человека, так и для типирования вирусов, поскольку для эпителия шейки матки особенно «опасными» являются 16 и 18 типы.

Схема ускоренной окраски гематоксилин-эозином, разработанной в МНИОИ им. П. А. Герцена

1. Мазки погружают в

смесь Никифорова
на 15 минут.

2. Спирт этиловый 70° 2—3 мин,

3. Спирт этиловый 50° 2—3 мин,

4. Вода дистиллированная 1 мин.

5. Краска гематоксилин (по Эрлиху).7-20 мин.
В зависимости от зрелости краски

6. Вода водопроводная 3 мин.

7. 1% раствор соляной кислоты на 70% спирте

~ 1 сек  До побурения препарата

8. Вода водопроводная

Прополоснуть, до посинения препарата

9. Высушить фильтровальной бумагой

10. Спирт этиловый 70° 1 мин.

11. Спирт этиловый 90° 1 мин.

12. Спирт этиловый 96° 1 мин.

13. 0,5—1% спиртовый (96°) раствор эозина  1—2 мин.

14. Спирт этиловый 96° 10—20 сек.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Медицинский взгляд на еду
Adblock
detector