Окраска гематоксилин эозином цитология

9. Электронно-микроскопические методы исследования гистологических препаратов.

Электронно-микроскопическая
цитохимия, Электронно-микроскопическая
иммуноцитохимия и Электронно-микроскопическая
авторадиография

а) Гистохимические
методы основаны на
специфической реакции между
химическим реактивом и определённым
компонентом препарата. 
б) Образующийся
продукт реакции имеет окраску, отличную
от окраски исходного реактива.

1а)
РНК

Реакция
Браше.

1. Реактив
(как отмечалось, — смесь двух
красителей:
метилового зелёного и
пиронина.

2.
а) А. Пиронин специфически
окрашивает 
РНК
в
 красный
цвет

Б. Поэтому
на препарате ядрышки (в составе ядра)
и рибосомбогатые участки цитоплазмы
имеют 
красный цвет.

б)
Другие структуры ядра (помимо ядрышек)
— 
зелёные.

3. Обычно
делают и контрольный препарат, который
перед окрашиванием обрабатывают
рибонуклеазой.

1б)
ДНК

Реакция
Фёльгена.

1. Основной
реактив — фуксинсернистая кислота
(реактив Шиффа).

2. ДНК-содержащие
структуры
 окрашиваются
в 
пурпурно-красный
цвет
.

2.
Белки

Используются
различные реакции; в том числе:

а)
с бромфеноловым синим (у белков
— 
тёмно-фиолетовая
окраска
);
б)
со смесью нингидрин-реактив Шиффа
(белки приобретают 
красный
цвет
).

3а)
Полисахариды

ШИК-реакция.

1. Реактив
— 
Шифф-периодная кислота
(выделенные буквы и составляют
аббревиатуру 
ШИК).

2. Периодат
способствует образованию в субстрате
альдегидной группы, которая
взаимодействует с реактивом Шиффа.

3. На
препарате ШИК-положительные компоненты
(например, гранулы гликогена)
имеют 
тёмно-красный цвет.

3б)
Гликозамин-
гликаны

Реакция
с толуидиновым синим.

1. При
взаимодействии толуидинового синего
с веществами, содержащими много
кислотных групп, наблюдается
метахромазия

— изменение
окраски с 
синей на фиолетовую и красную.

2. Подобным
свойством обладают, в частности,
компоненты аморфного вещества
соединительной ткани — гликозамингликаны

(являющиеся,
как известно, 
гетерополисахаридами с
высоким содержанием кислотных
радикалов).

4.
Нейтральный
жир

Реакция
с суданом III
 (о которой уже
упоминалось).

Капли
жира в жировой клетке окрашиваются в
яркий 
оранжево-красный
цвет
 благодаря
растворению в них красителя.

3. Помывка в воде.

После
фиксации материал промывают (чаще всего 
в течение нескольких часов в проточной
воде) с тем, чтобы избавить его от избытка
фиксатора и различных осадков фиксирующих
жидкостей.

Изучить
с помощью микроскопа такие фиксированные
кусочки органов невозможно, т.к. они не
прозрачны. Чтобы кусочек органа можно
было микроскопировать, его надо разрезать
на очень тонкие пластинки – срезы,
толщина которых измеряется  в
микрометрах.

Такие срезы получают с
помощью специальных приборов –
микротомов. Но для того, чтобы резать
на микротоме кусочек ткани, ее надо
предварительно уплотнить.

Это достигается
путем  пропитывания застывающими
жидкостями – расплавленным парафином.
Парафин в воде не растворяется, и поэтому
промытый после фиксации кусочек ткани
необходимо предварительно обезводить,
 и только затем пропитывать.

5. Уплотнение (заливка).

При
заливке кусочки предварительно
пропитываются теми жидкостями, которые
служат растворителями для  парафина
(ксилол или толуол).

Заливка
в парафин. При заливке в парафин кусочки
из абсолютного спирта переносятся в
смесь абсолютного спирта с хлороформом
или ксилолом, взятых поровну, затем
чистый ксилол и, наконец, в расплавленный
насыщенный раствор парафина в хлороформе,
где они находятся в термостате при
температуре 37º  до 1 суток и более.

Дальнейшая  заливка проводится в
термостате при температуре 54º -56º в трех
порциях парафина. Окончательная заливка
проводится в парафин с добавлением
воска, который наливают в специальные
бумажные коробочки или стеклянные
чашки, а затем  эти коробочки или
чашки после появления на поверхности
парафина пленки, погружают в воду.

Происходит
полное затвердение парафина. Кусочки
с окружающим их парафином извлекают из
коробочек и с помощью расплавленного
парафина, наклеивают на деревянные
кубики, получаются парафиновые блоки.

Уплотнения
также можно добиться  замораживанием
кусочка органа (срочная биопсия). 

7. Окрашивание.

Изготовленные
на микротоме срезы окрашиваются. Перед
окраской из парафиновых срезов обязательно
удаляют парафин (растворением в ксилоле).

Окрашивание
необходимо производить для  того,
чтобы отчетливо выявить под микроскопом
тонкие структуры объекта. В неокрашенных
срезах большинство структур одинаково
преломляет свет, поэтому рассмотреть
их не удается.

Выявление
на срезе гистологических структур
основано на неодинаковом их отношении
к красителям. Одни структуры среза
вступают в реакцию с кислыми красителями
и ими окрашиваются (ацидофильные,
оксифильные структуры), другие реагируют
с основными красителями и окрашиваются
преимущественно ими (базофильные
структуры). Некоторые структуры
окрашиваются и кислыми и основными
красителями.

По
происхождению различают краски
естественные, к которым относятся краски
растительного и животного происхождения,
и краски искусственные. Краской
растительного происхождения является
гематоксилин, который добывается из
кампешевого дерева, растущего в Америке
и  в Армении.

К
краскам животного происхождения
относится кармин, который добывается
из насекомых кошенили, живущих на
кактусовых деревьях в Мексике, Армении
и др.

По
окрашиванию определенных гистологических
структур различают краски ядерные
(окрашивание ядра), цитоплазматические
(окрашивающие цитоплазму), и специальные,
окрашивающие избирательно определенные
структуры.

окраска гематоксилин эозином цитология

Ядерные
краски – гематоксилин, кармин, сафранин,
метиленовая синь, азур, тионин.

Цитоплазматические
краски – эозин, пикрофуксин.

Существуют
специальные краски и реактивы: судан Ш
(окрашивает жир в оранжевый цвет),
осмиевая кислота (импрегнируемый ею
жир окрашиватся в черный цвет),
резорцинфуксин Вейгерта (дает темно-синюю
окраску эластических волокон), орсеин
(окрашивает эластические волокна в
бурый цвет).

Чаще
всего для окрашивания гистологических
срезов применяется окрашивание раствором
гематоксилина (приготовленным по методу
Бемера) и 1-2% эозином.

8. Заключение среза.

Окрашенные
и промытые в воде срезы во избежание
помутнения обезвоживают в спиртах (70º,
96º),  просветляют в карбол-ксилоле,
ксилоле, а затем на предметное стекло,
где находится срез, помещают каплю
бальзама  и срез накрывают покровным
стеклом.

Бальзам представляет собой
растворенную в ксилоле смолу одного из
видов сосны, растущей в Канаде (канадский
бальзам),  смолу пихты (сибирский
бальзам) или специальную синтетическую
среду.

При
исследовании биопсий с целью уточнения
диагноза в гистологических лабораториях
прибегают к ускоренной обработке
материала. Кусочки тканей и органов при
этом проходят те же этапы обработки, но
за 5-7 дней.

Иногда производится так
называемая срочная биопсия, когда в
течение 15-80 мин. материал фиксирует,
получают срезы, окрашивают их и заключают.
Быструю фиксацию производят в 10%
формалине, подогреваемом пламенем
горелки или с использованием СВЧ-печи.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Медицинский взгляд на еду
Adblock
detector