Окраска цитологических препаратов

Окраска по методу Муромцева

1. Фиксация абсолютным метиловым спиртом. Это лучший метод фиксации. Сухие мазки на 3 ми-нуты погружаются в абсолютный метиловый спирт или на то же время спирт наливается на мазок, вполне покрывая препарат.

2. Фиксация абсолютным этиловым спиртом, смешанным с равным количеством эфира. Фиксация длится 10—30 минут в обычных сосудах для гистологических растворов. Этот способ значительно хуже, так как даёт много артефактов.

Посредством окраски препарата наиболее отчетливо выявляется тончайшая структура, как ядра, так и цитоплазмы. Принцип современных методов окраски мазков крови открыт в 1891 г. Д. Л.

Романовским и заключается в избирательном поглощении (химическом и коллоидальнохимическом) веществами клетки трёх красящих веществ — азура метиленовой синьки и эозина.

Ядро клетки, богатое нуклеопротеидами и нуклеотидами, базофильно, т. е. окрашивается основными красками с избирательным поглощением а з у р а.

Цитоплазма молодых клеток, от-носительно богатая нуклеиновыми кислотами (нуклеотидами), также, хотя и в меньшей степени, базофильна. При этом избирательно погло-щается преимущественно метиленовая синь-ка.

Лимфоциты сохраняют базофилию цитоплазмы на всех стадиях развития, избирательно поглощая метиленовую синьку. Наличие базофилии молодой цитоплазмы, указывающее на относительное богатство её нуклеиновыми кислотами, связано с сохранением способности молодых клеток к интенсивному синтезу белков.

Лимфоциты сохраняют эту способность на весь онтогенез.

Базофилия гранул базофилов определяется наличием в них кислой слизи (мукоитиносерная кислота).

В лабораторной практике чаще всего пользуются следующими способами окраски по методу Романовского.

Окраска раствором Гимза

Краска Гимза, применяемая при окраске по ме-тоду Романовского, представляет собой комбинацию метилен-азура (азур II) и эозина (В, жёлтого). Она состоит из азура II*—3,0, эозина В —0,8, хими-чески чистого глицерина 250,0 и метилового спирта 250,0.

Эта краска обычно отпускается готовой. Очень многое в успехе окрашивания определяет безупреч-ное качество раствора краски, а последнее в высшей степени зависит от реакции воды.

Для приготовления рабочего раствора краски употребляется дважды дистиллированная вода. Обыч-но она имеет рН=5,4, т. е. слишком кисла, и даёт слабую, плохую окраску.

Поэтому такую воду нуж-но подщелочить, прибавив к 2—3 л воды несколько капель 1-процентного раствора соды. Лучшим рН воды следует считать 6,8—6,9 (до 7,1).

Практически пригодность воды к окрас-ке определяют по растворению в ней гематоксилина. В 10 см3 дистиллированной воды (лучше всего в часовом стёклышке) кладут пинцетом несколько крупинок гематоксили-на.

Не ранее как через 1 минуту и не позже 5 минут вода должна окраситься в ясный слабофиолетовый цвет. Более раннее и интенсивное окрашивание ука-зывает на сильно щелочную реакцию, более позд-нее — на кислую.

Если нет очень хорошего гематоксилина, то реак-цию воды, подщелачиваемой раствором соды, можно определить, пользуясь в качестве индикатора ней-тральной красной.

В два химических стакана (или кол-бы Эрленмейера) наливают по 200 см3 дистиллированной воды и прибавляют 1 — 2 капли 1-процентного раствора нейтральной красной.

При рН дистиллированной воды, равном 5,4—5,5, получается свекловично-красная (рубиновая) окраска. После этого в один из стаканов прибавляют по капле, тщательно разме-шивая, 1% раствор соды до появления слабого оранжевого оттенка (цвет лососины).

Более кропотливо пользоваться индикаторами Михаэлиса и менее точно — универсальным индикатором.

1. Двуосновного фосфата натрия (Na2HP04. *2Н20)—17,814 г на 1 л (рН =8,302).

2. Одноосновного фосфата калия (КН2Р04) — 13,638 г на 1 л (рН =4,529).

Азур II — смесь в равных частях красок: азур I (диметилтиониохлорид) и метиленовой синьки. В постарев-шем растворе исходной краски Гимза метиленовая синька часто плохо окрашивает цитоплазму лимфоцитов (нет чисто голубого цвета). Тогда необходимо добавить метилено-вой синьки в исходный раствор краски.

Если к литру дистиллированной воды прибавить по 5 см3 того и другого раствора, то рН такой воды будет равен 6,813. Случайные колебания концентра-ции углекислоты в воздухе при таком способе не ока-зывают влияния на рН воды.

Перед окраской (ex tempore) к дистиллированной воде прибавляют исходный раствор краски Гимза из расчёта 1,0—1,5 капли краски на 1 см3 воды.

Рабочий раствор краски наливается пипеткой (ос-торожно!) на предметное стекло так, чтобы препарат (мазок крови) был полностью покрыт краской. Стёк-ла помещаются над широкой чашкой Петри на стек-лянных палочках, соединённых резиновыми трубками попарно.

Во избежание осадков, которые невозможно отмыть, можно стёкла укладывать мазками вниз, на стеклянные палочки, лежащие в чашке Петри, так, чтобы краска покрывала мазки полностью (способ академика Н. Д. Стражеско).

При первом способе на один мазок тратится 2,5— 3,0 см3 рабочего раствора краски.

Через 20—30 минут краску сливают, препараты промывают водопроводной чистой водой и высуши-вают на воздухе. Для окраски старой краской тре-буется меньше времени.

При окраске раствором Гимза хорошо дифференцируется структура ядра, несколько хуже — структура цитоплазмы, особенно нейтрофильная зернистость. Однако при очень умелом окрашивании и зернис-тость выявляется достаточно хорошо.

По этому методу плохо окрашиваются псевдоэозинофилы (палочкозернистые гранулоциты) крови сель-скохозяйственных птиц.

Окрашенные краской Гимза ядра имеют красивый фиолетово-красный цвет (цвет вишни); нейтрофиль-ная зернистость — розовато-фиолетовый; эозинофильная зернистость — розовый или красно-розовый; базофильная —цвета мальвы; азурофильная — красно-фиолетового цвета.

Цитоплазма лимфоцитов — голу-бая, моноцитов — от голубовато-серой до пепельно-серой.

Эритроциты — красновато-розового цвета, полихроматофилъные эритроциты — синеватые, базофильная пунктация эритроцитов — синяя.

Если нет хорошей готовой краски Гимза, то можно хорошо окрасить мазки по Н о х т у. Для окраски по Нохту приготовляется два раствора: 1) 1-промил-льный раствор азура II;

2) 1-промилльный раствор эозина. Перед приготовлением рабочего раствора кра-ску нужно оттитровать. Для этого сначала берут на 3 см3 дистиллированной воды 4 капли раствора азу-ра II и 3 капли раствора эозина (т. е.

Достаточно интенсивное окрашивание получается, если на 1,5 см3 азура II берётся 1,0 см3 эозина и 6 см3 воды.

Модификация Паппенгейма (Май-Грюнвальд — Гимза)

При этом способе окраски предварительная фик-сация мазка не нужна, так как первая краска — Май-Грюнвальд имеет растворителем метиловый спирт.

Метод окраски двухмоментный. Сперва мазок по-крывают 2 см3 неразведённой краски

Май-Грюнвальд, представляющей собой раствор в метиловом спирте эозина и метиленовой синьки. Если нет гото-вой надёжной краски, то растворяют приготовленный фабричным способом сухой порошок Май-Грюнвальд: 1,0 г порошка на 100 см3 абсолютного метилового спирта и 50 см3 чистого глицерина. Хорошая крас-ка получается и без глицерина.

Через 3 минуты к краске Май-Грюнвальд, находя-щейся на мазке, прибавляют 2 см3 дистиллированной воды и тщательно смешивают их продуванием или последовательным набиранием и выпусканием через тонко оттянутую пипетку.

ПОДРОБНЕЕ:   Цитология гинекологического соскоба с окрашиванием по романовскому

Когда, примерно через 1 минуту, мазок приобретает розовый оттенок, крас-ку с препарата сливают и после этого, не высуши-вая, 10—12—15 минут красят мазок рабочим рас-твором краски Гимза, а затем промывают чистой водопроводной водой.

Такая окраска особенно ценна для выявления псевдоэозинофилов (специальных гранулоцитов) ку-риной крови.

Результаты окраски: ядра красно-фиолетовые, ци-топлазма лимфоцитов голубовато-синяя, азурофильная зернистость лимфоцитов пурпурно-красная, миелоидная азурофилия фиолетово-коричневая, так же как и центральная субстанция кровяных пластинок.

Нейтрофильная зернистость коричневато-красная, до синевато-розовой; эозинофильная — от красно-оранжевой до кирпично-красного цвета; базофильная зернистость тёмного ультрамариново-фиолето-вого цвета (метахромазия);

В целом, мазки, окрашенные по этому способу, несколько богаче оттенками, чем при окраске раство-ром Гимза, но кажутся более тёмными, «мрачными».

Цветные таблицы картин крови выполнены с препаратов крови, окрашенных по Романовскому в модификации Паппенгейма, лучше всего диференцирующей струк-туру клеток.

Ускоренная окраска раствором Гимза (новая модификация)

Этот метод даёт хорошие результаты только в ру-ках опытного исследователя. Преимущество — бы-строта приготовления препарата, так как фиксация и окрашивание происходят одновременно.

Для работы необходимы капельницы ёмкостью в 30 см3, в которые наливается исходный раствор краски Гимза, разведённый пополам метиловым спир-том или чистейшим ацетоном. В хорошо закупоренной склянке этот раствор может сохраняться месяцами.

1) Вида и состава красителя;

2) Концентрации красителя, которая не всегда определяет красящую способность;

3) Продолжительность окраски;

4) Возраста окрашиваемого препарата. Препараты от 6 часов и до нескольких дней давности в большинстве случаев теряют мелкие структуpные тонкости;

5) pH среды оказывает сильное влияние на окрашиваемость и тон окраски. По-видимому безразлично каким способом добавляют pH-ионы, важна лишь их концентрация;

6) Не обнаружено никаких различий окрашиваемости от температуры холодильника до комнатной температуры.

Занятие 7 Отбор вирусосодержащего материала от погибших эмбрионов кур и дальнейшая работа с вирусосодержащим материалом.

  1. Студенты
    просматривают
    готовые препараты из патматериала с
    тельцами Бабеша-Негри, Пашена, Руборта,
    окрашенные
    по методу Муромцева и Морозова.

  2. Студенты
    готовят мазки из патматериала, окрашивают
    их по методу Романовского и микроскопируют.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:
Ознакомить
студентов с особенностями отбора

вирусосодержащего
материала от погибших эмбрионов кур и
дальнейшая работа с вирусосодержащим
материалом.


Подготовленный
для работы бокс;

— халаты,
перчатки, маски, головные уборы и бахилы;


зараженные 7-9 суточные куриные эмбрионы;


набор
стерильных хирургических инструментов
— пинцет, ножницы, скальпель
в стаканчике со спиртом;


стерильные пастеровские пипетки с
резиновой грушей;


спиртовки;


иодированный спирт для дезинфекции
скорлупы;



стерильная чашка Петри — 3 шт.;


флакон со стерильным физраствором;


стерильные пробирки — 10 шт.;


штатив для пробирок;


ватный квачик в пустой пробирке для
обжигания скорлупы.

Зараженные
куриные эмбрионы помещают в термостат
для дальнейшей инкубации при температуре
37°С — 38°С в процессе которой происходят
репродукция внесенных вирусов и их
накопление в соответствующих структурах.

За
эмбрионами ведут постоянное наблюдение,
просматривают на овоскопе, отбирая
погибших. Погибшие эмбрионы не обладают
подвижностью, их кровеносные сосуды
загустевают или в них выражена
прерывистость, нет пульсации.

Гибель
эмбрионов в первые 24 ч после заражения
чаще всего обусловлена размножением
грибов, бактериальной микрофлоры,
внесенных в эмбрион вместе с инокулятом,
или травмированием при заражении.

Эта
гибель считается неспецифической. В
более поздние сроки эмбрионы гибнут в
результате, как правило, размножения в
эмбрионах вируса. Обнаружив погибшие
эмбрионы, их сразу же переносят в
холодильник с температурой 4°С.

Такие
условия, с одной стороны, способствуют
сохранению активности накопившегося
в эмбрионе вируса, с другой – уплотнению
тканей и запустению сосудов, что
значительно облегчает последующее
вскрытие.

Эмбрионы инкубируют до момента
максимального накопления вируса. Для
каждого вируса и даже штамма этот срок
является определенным и варьирует в
пределах от 2 до 7-8 суток.

Вскрывают
куриные эмбрионы с целью обнаружения
признаков размножения в них вирусов и
получения вирусосодержащего материала.
Последнее требует правил асептики при
вскрытии.

В
зависимости от того, каким вирусом был
заражен эмбрион (а значит в какой
структуре он накопился соответственно
тропизму), вирусосодержащим материалом
могут служить ХАО, ткани зародыша,
желточный мешок (его стенки), а также
аллантоисная и амниотическая жидкости.

В последнем случае выделение вируса
наиболее удобно, так как экстраэмбриональные
(аллантоисная, амниотическая) жидкости
представляют, по существу готовую
суспензию вируса.

Перед
вскрытием скорлупу обрабатывают
йодированным спиртом (фламбируют).
Стерильным ножницам срезают скорлупу
над воздушной камерой, через которую
заражали.

Обнажившуюся
ХАО осматривают, приподнимая ее пинцетом
с целью установления в ней
патологоанатомических изменений. Часть
ХАО, на которую был нанесен вирусосодержащий
материал, имеет обычно наиболее выраженные
изменения.

Для более тщательного осмотра
ее и взятия этой части приподнимают
пинцетом ХАО в этом месте срезают как
можно больше, переносят ее в стерильную
чашку Петри с физраствором, ополаскивают,
расправляют пинцетами и рассматривают
на темном фоне.

Наиболее характерные
изменения на ХАО соответствуют
определенному вирусу: очень часто
просматриваются округлые воспалительные
очаги, белесоватые перламутровые бляшки
с некротическим центром, серовато-белый
цвет оспин, расширение сосудов и др.

Аллантоисную
жидкость в количестве до 10 мл отсасывают
пипеткой, которой прокалывают
подскорлуповую оболочку ХАО над телом
зародыша. Такое направление пипетки
предотвращает случайный разрыв стенки
желточного мешка и смешивание его
содержимого с набираемой аллантоисной
жидкостью.

Амниотической
жидкости удается отсосать до 1 мл. Для
этого после удаления аллантоисной
жидкости пипетку вводят в амнион между
головой и телом зародыша под его шеей.

Для
получения желточного мешка как
вирусосдержащего материала желток
извлекают на чашку Петри, стенку его
разрезают ножницами и отполаскивают
от содержимого в физрастворе. Тело
зародыша извлекают удерживая его за
шею.

ПОДРОБНЕЕ:   Цитологические основы бесполого размножения

Наличие
гемагглютинирующего вируса определяют
в ориентировочной реакции гемагглютинации.

При
вскрытии куриных эмбрионов ставят
бактериологический контроль
вирусосодержащего материала посевом
на МПА, МПБ, МППБ и среду Сабуро.
Вирусосодержащий материал хранят при
минус 25°С и ниже.

  1. 1.Студенты
    знакомятся с оборудованием бокса.

  2. Студенты
    знакомятся с методами заражения культур
    клеток вирусом.

  3. Студенты
    проводят микроскопию погибших зараженных
    культур клеток.

  4. Студенты
    знакомятся с методами заражения культур
    клеток вирусом.

  5. Студенты
    проводят микроскопию нормального
    монослоя культур клеток.

  6. Студенты
    оценивают ЦПД монослоя культур клеток
    под действием вируса.

  1. Студенты
    знакомятся с особенностями устройства
    вирусологических лабораторий.

  2. Студенты
    знакомятся с правилами техники
    безопасности при работе с вирусами и
    вируссодержащим материалом.

  3. Студенты
    знакомятся со схемой диагностики
    вирусных болезней.

Контрольные вопросы:

  1. Что такое
    элементарные тельца, у каких вирусов
    их можно обнаружить?

  2. Что такое
    тельца-включения, у каких вирусов их
    можно обнаружить?

  3. Каким образом и
    для чего окрашивают препараты по методу
    Романовского?

  4. Каким образом и
    для чего окрашивают препараты по методу
    Муромцева?

  5. Каким образом и
    для чего окрашивают препараты по методу
    Михина?

  1. Что такое явление
    люминесценции?

  2. Каков закон Стокса,
    объясняющий явление люминесценции?

  3. Каким образом
    работает люминесцентный микроскоп?

  4. Что и как изучают
    в люминисцентный микроскоп?

  5. Какие применяются
    флуорохромы?

  6. Что такое
    флуорохромирование?

  7. Для каких целей
    проводится флуорохромирование?

  8. Каковы методы
    флуорохромирования?

  1. Каково
    строение электронного микроскопа?

  2. Каков
    принцип работы электронного микроскопа?

  3. Как
    готовятся препараты для просмотра их
    в электронном микроскопе?

  1. Для каких целей
    и какими методами заражают лабораторных
    животных в вирусологической практике?

  2. Каковы признаки
    наличия вируса в организме лабораторных
    животных?

  3. Каковы особенности
    культивирование вирусов в организме
    лабораторных животных?

  4. Для каких целей
    заражают курные эмбрионы?

  5. Каково преимущество
    заражения куриных эмбрионов?

  6. Каковы методы
    заражения куриных эмбрионов?

  1. Для каких целей
    вскрывают курные эмбрионы?

  2. Каковы признаки
    наличия вируса в куриных эмбрионах?

  3. Каковы методы
    вскрытия куриных эмбрионов?

  1. Как
    проводят подбор культур клеток для
    заражения их вирусом?

  2. Каковы
    методы заражения культур клеток вирусом?

  3. Какие
    культуры клеток используют при
    нкубировании определенных вирусов?

  4. Что
    такое ЦПД вируса?

  5. Каковы
    изменения в монослое клеток под действием
    вируса?

  6. Как
    оценивается ЦПД вирусов?

  1. Каковы
    особенности устройства вирусологических
    лабораторий?

  2. Каковы
    правилами техники безопасности при
    работе с

вирусами
и вируссодержащим материалом?

  1. Какова
    схема диагностики вирусных заболеваний?

  1. Каким
    образом готовится 10%рабочая
    суспензия из патматериала?

  2. Каковы
    методы очистки вируссодержащего
    материала?

  3. Каковы
    методы концентрации вируссодержащего
    материала?

Окраска по методу Муромцева

Через 1/2 минуты — 1 минуту к краске на мазке приливают около 10 см3 подщелочённой дистиллированной воды (1—2 капли 1-процентного раствора щелочи на 50 см3 воды).

Покачиванием чашечки хорошо перемешивают краску с подлитой водой. Через 10— 15 минут воду с краской сливают и мазок промывают водопроводной (недистиллированной!) водой.

В случае приготовления основного раствора с аце-тоном особенно хорошо выявляется зернистость структура ядер кровяные пластинки.

* Описание цветов дано, с некоторыми небольшими изменением, по А. II. Крюкову.

Окраска крови и кровепаразитов по Г. Эпштейну

Фиксация метиловым спиртом

Готовят два раствора.

1-й: дистиллированной воды 100 см3; лимоннокислого лития — 1 г; толуидиновой голубой— 1г. По-сле разведения профильтровать.

2-й: насыщенный водный раствор пикриновой кислоты.

Мазки красят 20—30 минут в первом растворе и, ополоснув в проточной воде, помещают на 1—2 секунды во второй раствор (пикриновой кислоты). Промывают (тщательно!

Окраска: эритроциты зелёные; ядра лейкоцитов фиолетово-синие; базофильная зернистость вишнё-вая; эозинофильная зернистость изумрудно-зелёная; нейтрофильная зернистость серая; у кровепаразитов ядро красное, а цитоплазма синяя.

Окраска составом Лейшмана

На нефиксированный препарат налить 15—20 ка-пель готового раствора краски Лейшмана (0,1 г порошка краски растворить в 10 см3 метилового спирта). Через 2,5—3 минуты прибавить 30 капель дестиллированной воды и красить ещё 5 минут. Про-мыть в течение 2—3 минут проточной водой и высу-шить на воздухе.

Специальные способы окраски и фиксации мазка

а) Получение и окраска толстой капли. На хорошо промытое (подщелочённой водой, затем спиртом с эфиром) предметное стекло наносят 2 крупные капли крови.

Собственно, достаточно одной капли, но вто-рая служит «резервом» на случай неосторожного сти-рания одной капли, неудачи окраски и т. д. Каждая капля сейчас же, с помощью иглы, распределяется по стеклу ровным слоем — примерно в 14 — 12 мм толщины, чтобы получились пятна размером с деся-тикопеечную монету.

После этого высохший препарат дважды окраши-вают рабочим раствором Гимза (1 капля исходного спиртового раствора Гимза на 1 см3 дистиллирован-ной воды).

Первое окрашивание длится около 3 минут после того, как в растворе краски появится красное облачко растворившегося гемоглобина. Затем один конец предметного стекла слегка приподни-мают и старый раствор Гимза заменяют новым, при-ливая его очень осторожно с приподнятого конца препарата, в то время как прежний раствор краски с гемоглобином стекает с другого конца.

Значение метода состоит в том, что в толстой капле удается обнаружить таких паразитов крови, которые находятся в нейв небольших количествах. Быстро устанавливается наличие или отсутствие эозинофилов и производится их подсчет их подсчёт.

То же самое в отношении базофильных эритроцитов.

б) Оксидазная и пероксидазиая реакции лейкоцитов. Оксидазная реакция основана на возникновении индофеноловой голубой краски при воздействии оки-сляющих ферментов на анафтол и диметилпарафенилендиамин; в местах локализации оксидаз в клетке возникает синее окрашивание.

1. Фиксация мазка в смеси из 1 части 40-про-центного формальдегида и 9 частей 95-процентного спирта в продолжение нескольких секунд пли 40-процентного формальдегида и абсолютного алкоголя аа в продолжение 15—20 минут.

2. Окраска: а) 3 минуты слегка разведённым 1-процентным водным щелочным раствором анафтола (раствор приготовляется следующим образом: анафтол при нагревании в дестиллированной воде поднимается кверху и плавает в жидком виде;

после введения в раствор кристалла едкой щёлочи анаф-тол растворяется в воде); б) не удаляя анафтола, на препарат наслаивают 1-процентный водный раствор диметилпарафенилендиамина.

Через несколько ми-нут зернистость лейкоцитов, содержащая оксидазу, становится темносиней. Докрашивается препарат сильно разведённым раствором фуксина Циля.

Пероксидазная реакция.

а) Окраска по Край-биш в модификации Грэма. Хорошо высохший мазок в течение 10—15 минут фиксиро-вать жидкостью, состоящей из 1 части 40-процент-ного формалина и 9 частей 95-процентного спирта.

ПОДРОБНЕЕ:   Рак шейки матки. Цитологическое исследование и кольпоскопия

После фиксации слегка промыть водой и покрыть раствором бензидина (приготовление: к 10 см3 40-процентного этилового спирта прибавляется не-сколько кристаллов бензидина 00,2 см3 3-процент-ной перекиси водорода). Окраска длится 5 минут. Затем смыть водой.

Места локализации пероксидаз окрашиваются сначала в сероватый, а затем в золотисто-коричне-вый цвет.

Последующее докрашивание — тионином, метиленовой синькой или краской Гимза.

б) Окраска по Сато. Воздушносухие маз-ки фиксируют в течение 30 секунд 1/2-процентным раствором медного купороса (CuS04) и затем окраши-вают бензидином с перекисью водорода (рецепт приготовления — как в предыдущем методе).

Через 2 минуты препарат осторожно промывают дистил-лированной водой, на мазок наливают слой 1-процент-ного водного раствора сафранина, через 15—20 минут сафранин смывают водой и высушивают препарат на воздухе (избегать высушивания фильтровальной бу-магой!).

Пероксидазо-положительные гранулы окрашивают-ся в темносиний цвет, ядра — в красно-жёлтый; эритроциты не окрашиваются.

Посредством оксидазной и пероксидазной реакций облегчается диференциация миэлоидных клеток от лимфоидных. Обе реакции дают аналогичные резуль-таты, но оксидазная реакция более чувствительна.

Нейтрофилы и эозинофилы реагируют резко поло-жительно, базофилы так же, но только на ранних стадиях развития. Зрелые формы оксидазо-отрицательны. Однако ряд авторов считает, что и зрелые базофилы оксидазо-положительны.

Лимфоциты дают безусловно отрицательную реак-цию. Моноциты — иногда очень слабо положительную.

С клинической точки зрения представляет инте-рес тот факт, что при некоторых инфекционных забо-леваниях у нейтрофилов исчезают положительная оксидазная п пероксидазная реакции.

в) Окраска токсической зерни-стости раствором Гимза при рН =5,4. Токсическую зернистость, в отличие от обычной, нормальной зернистости гетерофилов (нейтрофилов), избирательно окрашивают, при окраске по принципу Романовского раствором краски Гимза, применяя буферный раствор с рН =5,4.

Едкий натр (химически чистый) . 21,6 г

Уксусная кислота (химически чистая) ………….. 27,0 »

Дистиллированная вода до…..1000,0 см3

Исходной краски Гимза …………10см3

Дистиллигрованной воды ……….40 »

Буферного раствора до ………….100 »

Свежие мазки окрашивают в продолжение 1 часа, старые препараты — дольше (до 2 часов). Краска с мазка смывается буферным раствором и затем высу-шивается, как обычно.

При окрашивании препарат нужно класть на рас-твор краски мазком вниз.

Белые кровяные тельца — лейкоциты.

Лейкоциты (белые кровяные тельца) различаются между собой как морфологически, так и по биологи-ческой роли в организме. Будучи полноценными клетками, имеющими протоплазму и ядро, лейкоци-ты обладают отчётливо выраженной способностью к активному способу питания путём захвата и внут-риклеточного переваривания попадающих в кровь органических тел.

Эта способность приобретает первостепенное биологическое значение в случае проникновения в организм патогенных мик-робов: пожирание их лейкоцитами — фагоци-тоз (Мечников, 1882—1893) — составляет важней-шее средство борьбы организма с инфекцией.

Наряду с фагоцитозом, весьма важное значение имеет образование лейкоцитами иммун-ных тел. У многих низших, а весьма возможно и высших животных особые лейкоциты выполняют также функцию переноса питательных веществ (трефоциты).

Наконец, отдель-ные виды лейкоцитов (эозинофилы высших животных) способны обезвреживать токсины. Крупную роль лейкоциты играют в обмене веществ и в образовании так называемых трефонов — стимуляторов клеточ-ного роста, особенно в условиях регенерации тканей.

Структурные различия отдельных видов бе-лых кровяных телец изучены, начиная с работ П. Эрлиха (Р. Ehrlich, 1877—1898 гг.), достаточно хорошо. Значительно менее изучены их функцио-нальные особенности, их целлюлярная физиология.

Несмотря на огромное количество работ, онтогенез белой крови полностью ещё не выяснен. Наконец, сложная нейро-гуморальная регуляция сосудистой и внесосудистой белой крови исследована в чрезвы-чайно малой степени.

Основным принципом современной классификации лейкоцитов является морфологический.

У различных сельскохозяйственных и лаборатор-ных животных один и тот же тип лейкоцитов (особен-но эозинофилы и нейтрофилы, или гетерофилы) имеет специфические отличия в структуре.

Однако в главном структура каждого типа лейкоцитов у всех сельскохозяйственных животных весьма близка и поэтому целесообразно вначале дать их общее описание, без видовой дифференциации.

По структуре ядро эозинофилов близко к ядру нейтрофилов, но несколько бледнее и выглядит грубее, так как чередующиеся светлые (оксихроматин) и тёмные (базихроматин) участки ядра эозинофилов крупнее, чем у нейтрофилов.

По мере созревания клетки ядро эозинофильных лейкоцитов изменяется в том же направлении, что и нейтрофильных, т. е. ядерный жгут скручивается и утончается, сперва равномерно (юные и палочкоядерные формы),а затем отдельные участки (сегменты) почти перестают утончаться и остаются сравнитель-но толстыми, а находящиеся между ними — превра-щаются в «тончайшие нити (сегментоядерные фор-мы).

Однако сегментация ядра эозинофилов выражена не очень резко. Очень частой, типичной формой яв-ляется 2-дольчатая форма ядра, причём дольки напо-минают формирующиеся и только что отрывающие-ся капли, обращенные друг к другу узкими концами, соединёнными перемычкой, или две груши, соединён-ные плодоножками.

У овец полиморфность ядра эози-нофилов выражена сильнее. Хотя при некоторых болезнях можно наблюдать в крови изменение отношения между возрастными формами эозинофилов в сторону увеличения более молодых (палочкоядерных, юных и даже миэлоцитов.

— «сдвиг ядра влево»), но, ввиду относительной малочисленности (3—10%) эозинофилов, учёт ядер-ного сдвига в лейкоцитарной формуле не произво-дится.

  1. обнаружения
    вируса в патматериале;

  2. первичного
    выделения вируса из патматериала;

  3. накопления
    вирусной массы;

  4. поддержания
    вируса в лаборатории в активном
    состоянии;

Окраска гематоксилин-эозином, ускоренная методика.

1. Мазки погружают в

смесь Никифорова
на 15 минут.

2. Спирт этиловый 70° 2—3 мин,

3. Спирт этиловый 50° 2—3 мин,

4. Вода дистиллированная 1 мин.

5. Краска гематоксилин (по Эрлиху).7-20 мин.
В зависимости от зрелости краски

6. Вода водопроводная 3 мин.

7. 1% раствор соляной кислоты на 70% спирте

~ 1 сек  До побурения препарата

8. Вода водопроводная

Прополоснуть, до посинения препарата

9. Высушить фильтровальной бумагой

10. Спирт этиловый 70° 1 мин.

11. Спирт этиловый 90° 1 мин.

12. Спирт этиловый 96° 1 мин.

13. 0,5—1% спиртовый (96°) раствор эозина  1—2 мин.

14. Спирт этиловый 96° 10—20 сек.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Медицинский взгляд на еду
Adblock
detector