Взятие и отправка материала на цитологическое исследование

Назначение

Используется для диагностики in vitro.

Метод представляет собой процесс приготовления клеточных препаратов на жидкой основе. Он призван заменить традиционный метод приготовления микропрепаратов мазков по Папаниколау, применяющихся в скрининговых исследованиях для выявления рака шейки матки.

Средой для сбора и транспортировки гинекологических образцов, тестируемых в анализах амплифицированных ДНК BD ProbeTec™ Chlamydia trachomatis (CT) QI и Neisseria gonorrhoeae (NG) QI, является жидкий консервант SurePath® Preservative Fluid.

Инструкция по использованию SurePath® Preservative Fluid для подготовки образцов, используемых в этих анализах, см. на листках-вкладышах в упаковках наборов для анализа.

Взятие материала

Мазок на цитологию или, как его еще называют, пап-тест используется в медицинской диагностике более полувека. Его преимущества – дешевизна и эффективность.

Он позволяет проверить такое уязвимое место женского организма, как шейка матки, на наличие (отсутствие) в ее клетках не менее пяти типов отклонений.

Все очень просто. Не нужно никаких особых мероприятий. Прямо во время стандартного осмотра гинеколога с использованием зеркала, доктор щеточкой собирает клетки с трех участков, в числе которых вход шейки матки, стенки влагалища, а также цервикальный канал.

Все совершенно безболезненно и вполне комфортно, если можно употребить это слово в отношении гинекологического осмотра. На вопрос, сколько делается этот анализ, точно ответить никто не возьмется – каждый случай индивидуален.

Полученный материал наносится на специальное стекло, равномерно распределяется на нем, подсушивается и отправляется в лабораторию, где в дело вступают лаборанты.

  • Количество клеток в отношении к площади их распределения;
  • Клеточное строение и патологические отклонения в нем;
  • Размер клеток и взаимное расположение;
  • Форма эпителия.

Нанесение мазка сразу на сухое стекло – этот метод цитологии считается классикой. Все больше гинекологов, стремясь уменьшить количество ложно-положительных результатов, выбирают другой способ проведения этого обследования.

Называется он «жидкостная цитология» (пап-тест) и отличается тем, что мазок наносится сразу в специальную среду, в которой посредством центрифуги клетки концентрируются ровным слоем, одновременно «отмываясь» от загрязнений.

Помимо опасного рака, оба вида цитологического обследования позволяют вовремя выявить воспаление и ряд многих опасных состояний эпителия, предшествующие онкологии, например, дисплазию.

В большинстве случаев взятие мазка не сопровождается кровянистыми выделениями, но если 2-3 дня после обследования они наблюдаются, это не является отклонением.

Когда же после осмотра гинеколога появилось сильное кровотечение, озноб, боль в животе и повышенная температура тела, без срочного повторного осмотра обойтись нельзя.

Важно: отправляемый материал должен быть из одной локализации.

Взятие материала для цитологического исследования может производиться несколькими методами. Рассмотрим два из них: метод внутриигольной пункционной биопсии и изготовление мазка-отпечатка.

Краткий обзор и описание

Скрининговое исследование для выявления рака шейки матки с использованием метода Папаниколау (Pap) включает микроскопическое исследование экто- и эндоцервикальных клеточных образцов, нанесённых на предметные стёкла и окрашенных по методу Папаниколау.

Цервикальное цитологическое скрининговое исследование с помощью мазка по Папаниколау позволило сократить уровень смертности от инвазивной карциномы шейки матки на 50-70%.

Поскольку цервикальное цитологическое исследование представляет собой скрининговое исследование, все обнаруженные патологии должны подтверждаться гистологическим исследованием.

Для точности диагноза по мазкам Папаниколау крайне важно соблюдать процедуры отбора и приготовления образцов. Для полной точности чрезвычайно важна рандомизация и равномерный отбор части образца.

Традиционная процедура взятия мазка по Папаниколау не предусматривает перемешивания образца перед приготовлением микропрепарата. Поскольку клетки на устройстве для взятия проб погружены в слизь, те клетки, которые переносят на микропрепарат, могут не быть репрезентативной выборкой всех клеток взятого мазка.

Клетки переносятся на предметное стекло в зависимости от того, в каком месте устройства для взятия проб они находились. Много клеток остаётся на устройстве для забора проб.

Неоднородность типичного образца цервикального мазка ведёт к тому, что мазки, приготовленные традиционным способом, трудно готовить, исследовать и интерпретировать.

Часто большие области микропрепаратов, приготовленных традиционным способом, покрыты примесями, клетками воспаления и пластинами эпителиальных клеток, которые могут скрывать ценный диагностический материал.

Кроме того, если мазок не зафиксирован немедленно после приготовления, клеточная морфология может исказиться по мере высыхания (воздушные артефакты).

Описываемый метод представляет собой метод для превращения жидкой суспензии взятого мазка цервикальных клеток в равномерно окрашенный гомогенный микропрепарат SurePath® без разрушения скоплений клеток, необходимых для диагностики.

Процесс включает консервацию клеток, их рандомизацию, обогащение диагностического материала, пипетирование и осаждение для создания клеточного препарата.

Полученный в результате этого процесса микропрепарат может использоваться для обычного цитологического скринингового исследования и категоризации по классификации Бетесда.

Показания для сдачи анализа

Каждая женщина должна сдавать этот анализ регулярно. Дело в том, что заподозрить воспалительный процесс, как цервикального канала, так и шейки матки он может и при обычном осмотре, а вот пап-тест сможет либо подтвердить опасения, либо развеять.

Но даже если доктор все-таки сам назначил цитологическое обследование шейки матки, то это совершенно не значит, что он уже заподозрил плохой диагноз.

Есть состояния, которые требуют обязательного и безотлагательного прохождения пап-теста. Вот некоторые из них:

  • Сахарный диабет и нарушения менструального цикла;
  • Обнаружение вирусов: генитального герпеса либо папилломы;
  • Ожирение и прием гормонов;
  • Нарушение репродуктивности, воспаление шейки матки либо цервикального канала;
  • Перед операцией или установкой внутриматочной спирали;
  • При планировании беременности;
  • При частой смене половых партнеров.

Принципы методики

Метод жидкостной цитологии представляет собой процесс приготовления клеточных препаратов цервикальных клеток на жидкой основе.

Гинекологические образцы собираются квалифицированным медицинским персоналом с помощью приспособления типа «метёлка» (например, Cervex Brush®) или эндоцервикального комбинированного устройства типа щёточки-шпателя (например, Cytobrush® Plus GT или Pap Perfect® компании MedScand (USA) Inc.

Взятие и отправка материала на цитологическое исследование

) со съёмными головками. Головку устройства снимают с ручки и помещают во флакон с жидким консервантом SurePath® Preservative Fluid. Флакон закрывают пробкой, прикрепляют этикетку и отправляют в сопровождении соответствующих  документов в лабораторию для обработки.

В лаборатории законсервированный образец перемешивают путём встряхивания, а затем переносят в пробирку с PrepStain® Density Reagent (плотным реагентом).

Стадия обогащения, состоящая из осаждения препарата на центрифуге через плотный реагент, частично удаляет из препарата ненужные для диагностики примеси и избыточные клетки воспаления.

После центрифугирования пробирку с обогащённым клеточным компонентом восстанавливают деионизированной водой, и клеточный материал ресуспендируют с помощью пипеточного дозатора путём последовательного отбора и выпуска жидкости.

Затем материал образца переносится в PrepStain® Settling Chamber (осадочную камеру), помещённую на предметное стекло SurePath® PreCoat. Клетки осаждаются под действием силы тяжести в течение короткого периода инкубации.

Избыточный материал сливают. Микропрепарат SurePath® PreCoat окрашивают, осветляют и накрывают покровным стеклом. Клетки располагаются в круге диаметром 13 мм.

Подготовка инвентаря

  • Отказаться от приема влагалищных мазей, тампонов и свечей;
  • Дождаться завершения критических дней;
  • Избегать чрезмерного употребления воды – за 3 часа до похода нельзя допускать мочеиспускания;
  • За 24 часа до сбора биоматериала отказаться от полового общения;
  • Не прибегать к спринцеванию;
  • Завершить общее лечение всех воспалительных заболеваний, вызывающих обильное выделение секрета.

Последний пункт можно считать выполненным только после сдачи контрольного мазка, который подтвердит полное выздоровление. При несоблюдении хотя бы одного из этих пунктов, скорее всего, придется сдавать цитологию повторно.

Для взятия, оформления и отправки материала на цитологию понадобится следующий инвентарь:

  • карандаш, маркер;
  • скальпель;
  • шприц (5, 10 или 20 мл);
  • кюретажная ложка;
  • гемостатический зажим;
  • цитологические щётки;
  • 2-4 предметных стекла;
  • пробирка Эппендорфа с транспортной средой CYTORICH;
  • бланк направления CYTOVET.

Ограничения

  • Гинекологические образцы для приготовления препаратов, получаемых с помощью ручного метода, должны собираться с помощью одобренного устройства типа «метёлка» в соответствии со стандартной процедурой взятия мазка, определённой производителем.
  • Приготовлением и исследованием препаратов TriPath Imaging®, Inc. на жидкой основе могут заниматься только лица, прошедшие обучение в компании TriPath  или иных организациях, уполномоченных компанией TriPath  на проведение подобного обучения.
  • Для обеспечения требуемой эффективности устройства следует использовать только материалы, поставляемые или рекомендуемые компанией TriPath Imaging®, Inc. Использованные материалы должны быть надлежащим образом утилизированы в соответствии с нормативами организации и действующим законодательством.
  • Все материалы предназначены для одноразового использования и не могут быть использованы повторно.
  • Для выполнения цитологического исследования SurePath® на жидкостной основе требуется 8,0±0,5 мл образца, собранного в SurePath® Preservative Fluid Collection Vial (флакон для забора мазка с жидким консервантом).

Какие заболевания обнаружит цитология

Чтобы расшифровать данные, которые встречаются в результате мазка на цитологию, нужно обязательно иметь медицинское образование. К сожалению, гинеколог не всегда хочет тратить время на развернутое объяснение картины заболевания.

Приоткрывая для пациентки завесу тайны ее здоровья, следует уточнить, что анализ мазка на цитологию описывает один из 5 типов клеточных (цитологических) изменений, перечисленных ниже.

Первый тип – отрицательный показатель. Это самый желаемый результат, поскольку он означает, что никаких отклонений не обнаружено. Второй тип. Его наличие подразумевает присутствие некоего воспаления.

Чтобы ответить на вопрос «Какого именно?», необходимы дополнительные анализы. Пройдя их и необходимое лечение, через 90 дней мазок на цитологию надо сдать еще раз.

Третий тип. Это сигнал о том, что в эпителии пациентки обнаружены единичные клетки, имеющие аномальное строение. Что это значит, можно определить на исследовании гистологии и микробиологии, но окончательный диагноз будет получен только после следующего мазка на цитологию, сданного спустя 90 дней после пап-теста, а также при наличии некоторых дополнительных данных (анализ крови и т.п.).

Четвертый тип. Он свидетельствует о реальном наличии злокачественного новообразования, которое требует комплексной диагностики (кольпоскопии, биопсии) и срочного лечения.

Пятый тип – раковые клетки обнаружены в критично-большом количестве, поэтому следующим шагом должна быть биопсия, гистологическая диагностика и тесное сотрудничество с онкологом.

Важно понимать, что сдав цитологический мазок, можно узнать только степень изменений, произошедших в клетках. Эти данные не показывают, какой именно диагноз за ними стоит.

Определить его можно только на основании сравнения результатов цитологии с другими анализами. Например, 2-4 уровень изменений может свидетельствовать о наличии таких проблем со здоровьем:

  • Эрозии;
  • Цервицита;
  • Папилломавируса;
  • Кандидоза влагалища или бактериального вагинита;
  • Герпеса;
  • Паракератоза шейки матки.

Предупреждения

  • Жидкий консервант SurePath® Preservative Fluid содержит водный раствор денатурированного этилового спирта и не предназначен для употребления внутрь. Смесь содержит небольшие доли метилового и изопропилового спиртов, которые при приёме внутрь могут быть опасны для здоровья и привести к слепоте.
  • Плотный реагент PrepStain® Density Reagent содержит азид натрия. Азид натрия может реагировать с медными и свинцовыми трубами, образуя высоковзрывчатые азиды металлов. При утилизации смойте большим количеством воды, чтобы предотвратить накопление азида.

Расшифровка результата

Помимо 5 типов изменений, расшифровка результата может поведать пациентке и другие сведения. Особенно, если она знает, что обозначают следующие цифры, буквы и термины:

  • Условное обозначение забора биоматериала из U – уретрального канала, C – цервикального, V – влагалища;
  • Нормальным количеством лейкоцитов считается уровень до 15 единиц;
  • Присутствие таких названий, как грибки, трихомонады и гонококки, говорит о наличии половых инфекций;
  • Гарданеллы и грибки – симптомы воспаления, вызванного вагинальным кандидозом;
  • Большое количество эпителия цилиндрической, железистой или плоской формы, сочетающееся с признаками атрофии, свидетельствует о большой вероятности присутствия онкологии;
  • Плоского эпителия должно быть не более 10 единиц, иначе можно говорить о доброкачественном новообразовании;
  • Среднее количество слизи – норма;
  • Степень чистоты: первая и вторая – хорошая влагалищная среда, третья и четвертая – требующая дополнительной диагностики.
  • ASCUS – атипичные клетки;
  • LSIL – малое количество плоского эпителия;
  • HSIL – критичное количество плоского эпителия.

Все женщины должны понимать, что онкологический диагноз за 5 дней, которые отведены на цитологический анализ, поставить невозможно. От пап-теста до него нужно преодолеть несколько этапов (обследований), поэтому идти на него каждый раз, как на плаху – ошибочная установка.

Поэтому лучше взять его себе на вооружение, как надежного помощника, который позволит обнаружить гинекологическую проблему на самой первой фазе развития, что в большинстве случаев дает 100% гарантию выздоровления.

  • К препаратам на жидкой основе, приготовленным по методу компании TriPath Imaging®, Inc., можно применять все диагностические критерии, применяемые в настоящее время в цитологических лабораториях для традиционных мазков по Папаниколау.
  • Любые патологические или сомнительные явления, обнаруженные при скрининговом исследовании, должны быть направлены патологу для ознакомления и диагноза. Любые мофологические изменения клеток важны и должны быть отмечены.

Меры предосторожности

  • Следует соблюдать указания по надлежащей лабораторной практике, а также все процедуры, рекомендованные при использовании метода жидкостной цитологии.
  • Все реагенты стабильны до истечения указанного срока годности при условии соблюдения рекомендованных условий хранения.
  • Бактериальная контаминация реагентов может привести к неправильным результатам.
  • Замена предметных стёкол SurePath® PreCoat на другие может привести к неоптимальным результатам.
  • Избегайте расплёскивания и распыления жидкостей. Используйте соответствующие средства защиты рук и глаз, а также защитную одежду.
  • Жидкий консервант SurePath® Preservative Fluid обладает бактерицидным действием и был проверен на действие против следующих микробов: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans, Mycobacterium tuberculosis и Aspergillus niger. Однако следует постоянно соблюдать универсальные меры предосторожности по обращению с биологическими жидкостями.

Отбор дополнительной аликвоты

Во флаконе для забора мазка с жидким консервантом доступен объём, достаточный для отбора до 0,5 мл однородной смеси клеток и жидкости для дополнительного тестирования перед выполнением теста SurePath® Pap (теста по Папаниколау). Оставшийся после отбора объём достаточен для теста по Папаниколау.

Несмотря на отсутствие свидетельств о влиянии отбора аликвоты из флакона для забора мазка с жидким консервантом на качество образца для цитологического исследования, в редких случаях в ходе этого процесса возможно неравномерное распределение соответствующего диагностического материала.

Если результаты исследования не соответствуют истории болезни пациента, медицинским работникам может потребоваться забор нового образца. Более того, цитологическое исследование решает клинические задачи, отличные от тестирования на заболевания, передающиеся половым путём (ЗППП), таким образом, отбор аликвоты может быть неприемлемым для некоторых клинических ситуаций.

При необходимости можно отобрать отдельный образец для тестирования на ЗППП вместо отбора аликвоты из флакона для забора мазка с жидким консервантом.

При отборе аликвоты из образцов с низкой насыщенностью клетками в SurePath® Preservative Fluid Collection Vial может остаться объём материала, недостаточный для выполнения теста SurePath® Pap (теста по Папаниколау).

Аликвоту следует отбирать перед выполнением теста SurePath® Pap. Допускается отбор только одной аликвоты из флакона для забора мазка с жидким консервантом до выполнения теста по Папаниколау, независимо от объёма аликвоты.

Методика

  1. Для обеспечения однородности смеси необходимо встряхивать флакон для забора мазка с жидким консервантом в течение 10-20 с. Затем в течение одной минуты следует отобрать аликвоту 0,5 мл.
  2. Наконечник пипетки для отбора аликвоты должен иметь аэрозольный барьер, а объём пипетки должен соответствовать объёму отбираемой аликвоты.
    Примечание. Не следует использовать серологические пипетки. Во избежание попадания загрязнений в SurePath® Preservative Fluid Collection Vial или в аликвоту необходимо соблюдать требования надлежащей лабораторной практики. Отбор аликвоты должен выполняться в соответствующем месте за пределами помещения, в котором выполняется амплификация.
  3. Визуально проверьте материал аликвоты в пипетке на наличие крупных твёрдых или полутвёрдых частиц. При обнаружении таких примесей в ходе забора аликвоты следует немедленно вернуть всю отобранную жидкость во флакон с образцом и отбраковать образец для дополнительного тестирования перед тестом по Папаниколау.
  4. Инструкции по обработке аликвоты в анализах амплифицированных ДНК BD ProbeTec™ CT QI и GC QI см. на листках-вкладышах в упаковках наборов для анализа, предоставленных их производителями.

Необходимые материалы

  • SurePath® Preservative Fluid Collection Vial (флакон для забора мазка с жидким консервантом)
  • PrepStain® Density Reagent (плотный реагент)
  • PrepStain® Settling Chambers (осадочные камеры)
  • SurePath® PreCoat Slides (предметные стёкла PreCoat)
  • Центрифужные пробирки
  • PrepStain® Syringing Pipettes (шприц-пипетки)
  • Наконечники аспиратора
  • Центрифуга
  • Штативы для микропрепаратов
  • Модульный аспиратор (необязательно)
  • Лоток для обработки (необязательно)
  • Приспособление типа «метёлка» или эндоцервикальное комбинированное устройство типа щёточки-шпателя со съёмной головкой (головками) для взятия мазка
  • Устройство для встряхивания
  • Точные пипетки со съёмными наконечниками
  • Деионизированная вода (pH 7,5-8,5)
  • Изопропиловый спирт и химически чистый этиловый спирт
  • Реагенты для окрашивания
  • Осветляющее средство, среда для заливки и покровные стёкла

Хранение

  • Жидкий консервант SurePath® Preservative Fluid без цитологических образцов может храниться при комнатной температуре (от 15 до 30 ºС) до 36 месяцев со дня изготовления.
  • Срок хранения SurePath® Preservative Fluid с цитологическими образцами – до 6 месяцев в холодильнике (от 2 до 10 ºС) или 4 недели при комнатной температуре (от 15 до 30 ºС).
  • SurePath® Preservative Fluid, содержащий цитологический образец для использования в анализах амплифицированных ДНК BD ProbeTec™ CT QI и GC QI может храниться и транспортироваться до 30 дней при температуре от 2 до 30 ºС перед переносом в пробирки для разбавления образца с целью проведения цитологических исследований на жидкостной основе анализах амплифицированных ДНК BD ProbeTec™ QI.

Процедуры

  1. После взятия мазка с помощью Cervex-Brush® компании Rovers или аналогичного устройства для взятия мазка снимите головку устройства с ручки и поместите во флакон с жидким консервантом. Закройте флакон пробкой, прикрепите этикетку и отправьте в лабораторию.
  2. После регистрации флаконов с образцами в лаборатории поместите каждый флакон в штатив для обработки в комплекте с маркированной центрифужной пробиркой, в которую заранее помещено 4 мл плотного реагента PrepStain® Density Reagent и маркированного SurePath® PreCoat Slides (микропрепарата PreCoat). Плотный реагент следует добавить в пробирку до того, как туда будет добавлен образец, иначе качество процедуры снизится.
  3. Энергично встряхните каждый флакон с образцом в течение 10-20 секунд.
    (Во флаконе для забора мазка с жидким консервантом доступен объём, достаточный для отбора до 0,5 мл однородной смеси клеток и жидкости для дополнительного тестирования. Оставшийся после отбора объём достаточен для теста по Папаниколау. Отбор аликвоты может производиться после встряхивания в ходе теста с жидким консервантом SurePath®.)
    – Перенесите образец с помощью дополнительного автоматического устройства PrepMate™ Automated Accessory и шприц-пипеток PrepStain® Syringing Pipettes. См. инструкции в руководстве по эксплуатации устройств PrepMate.
  4. Поместите пробирки в штативы центрифуги в порядке, указанном на диаграмме последовательности расположения в руководстве по эксплуатации (каждый штатив вмешает до 12 пробирок). Последовательность размещения пробирок очень важна. Должен соблюдаться баланс.
  5. При необходимости сбалансируйте центрифужные пробирки добавлением консервирующей жидкости и центрифугируйте образцы в течение 2 минут при 200 g.
  6. При использовании модульного аспиратора включите систему Easy Aspirator и установите давление 230±50 мм рт. ст. Наденьте на аспиратор системы Easy Aspirator чистые наконечники.
  7. Извлеките штативы центрифужных пробирок из центрифуги. Медленно опустите наконечники системы Easy Aspirator (или одноразовые пипетки для переноса) в центрифужные пробирки для удаления надосадочной фракции. По завершении устройство аспирации должно касаться верха пробирки. Между образцами промывайте наконечники аспиратора водой.
  8. Центрифугируйте пробирки в течение 10 минут при 800 g, чтобы сконцентрировать диагностический компонент в клеточный осадок на дне пробирки.
  9. Извлеките штатив с пробирками из центрифуги. Осторожно и быстро слейте жидкость в раковину. Держа штатив перевёрнутым, осторожно промокните пробирки фильтровальной бумагой так, чтобы клеточный осадок остался в пробирке.
  10. Пометьте предметное стекло PreCoat номером каждого образца, стараясь не касаться поверхности стекла. Поместите предметные стёкла в штатив и установите на каждое предметное стекло осадочную камеру. Положение каждого нумерованного предметного стекла PreCoat должно соответствовать положению соответствующей центрифужной пробирки.
  11. Добавьте 4 мл буферной деионизированной воды (pH 7,5-8,0) в каждую пробирку и хорошо перемешайте встряхиванием.
  12. Обрабатывая пробирки с образцами по одной, перемешивайте их встряхиванием и немедленно перенесите 800 мкл клеточной суспензии в соответственно пронумерованную осадочную камеру на предметном стекле PreCoat. Повторите операцию для каждого образца.
  13. Подождите 10 минут, чтобы произошло полное осаждение. После осаждения осторожно переверните лотки с предметными стёклами над раковиной, чтобы слить оставшуюся жидкость, и промокните лишнюю жидкость фильтровальной бумагой.
  14. Промойте каждую осадочную камеру 500 мкл денатурированного этилового спирта слейте жидкость. Повторите промывание спиртом, слейте лишнюю жидкость и промокните фильтровальной бумагой, держа образцы перевёрнутыми не менее 1 минуты.
  15. Удалите осадочную камеру.
  16. Окрасьте микропрепараты SurePath® и закройте их покровными стёклами.
Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Медицинский взгляд на еду
Adblock
detector