Раствор для жидкостной цитологии

Назначение

Используется для диагностики in vitro.

Метод представляет собой процесс приготовления клеточных препаратов на жидкой основе. Он призван заменить традиционный метод приготовления микропрепаратов мазков по Папаниколау, применяющихся в скрининговых исследованиях для выявления рака шейки матки.

Средой для сбора и транспортировки гинекологических образцов, тестируемых в анализах амплифицированных ДНК BD ProbeTec™ Chlamydia trachomatis (CT) QI и Neisseria gonorrhoeae (NG) QI, является жидкий консервант SurePath® Preservative Fluid.

Инструкция по использованию SurePath® Preservative Fluid для подготовки образцов, используемых в этих анализах, см. на листках-вкладышах в упаковках наборов для анализа.

Что такое цитология шейки матки: преимущества и недостатки

Мазок Папаниколау (другое название цитологии из шейки матки) является самым распространенным тестом для выявления рака на самых ранних стадиях. Благодаря такому простому исследованию, специалисты обнаруживают клеточные изменения задолго до проявления первых симптомов болезни.

Преимущества ПАП-теста по сравнению с биопсией тканей:

  • Легкость забора образца;
  • Практически полное отсутствие болезненных ощущений у пациента;
  • Отсутствие риска серьезных осложнений после самой процедуры;
  • Низкая стоимость.

К недостаткам можно отнести лишь то, что в некоторых случаях биопсия тканей показывает более точные и расширенные результаты, нежели цитология.

Любой результат анализа (кроме нормы) настораживает пациентку. Но на самом деле атипичные клетки цитологии не обязательно указывают на рак.

ASCUS.

Так, например, ASCUS указывает на то, что в клетках ткани, покрывающей шейку матки, обнаружены морфологические изменения. Атипия может быть спровоцирована обычным воспалением. Успокоить должно то, что ASCUS является самым распространенным «ненормальным» результатом ПАП-теста.

ASCH.

Указывает на то, что организм заражен вирусом папилломы. При этом не исключается достаточно глубокое внутриэпителиальное поражение. Увидев такой результат, гинеколог даст дополнительное направление на проведение кольпоскопии.

AGC.

Означает, что аномальными являются лишь клетки железистого эпителия. При отсутствии негативных симптомов, рекомендуется тактика наблюдения и повторный ПАП-тест через год. Аналогичные рекомендации получит и женщина с отметками NOS, LSIL в карте результатов.

HSIL и CIS.

Наиболее неблагоприятными считаются результаты HSIL и CIS. В первом случае обнаруживаются клетки с необратимыми изменениями. Это не указывает на развитие онкологического заболевания напрямую, но женщине придется дополнительно пройти кольпоскопию и сделать биопсию.

CIS.

А вот результат CIS означает, что карцинома уже начала развиваться. Выявлены клетки злокачественной природы. Однако результатов ПАП-теста недостаточно для постановки окончательного диагноза. Гинеколог обязательно назначит серию дополнительных исследований (биопсию, УЗИ, МРТ).

Краткий обзор и описание

Скрининговое исследование для выявления рака шейки матки с использованием метода Папаниколау (Pap) включает микроскопическое исследование экто- и эндоцервикальных клеточных образцов, нанесённых на предметные стёкла и окрашенных по методу Папаниколау.

Цервикальное цитологическое скрининговое исследование с помощью мазка по Папаниколау позволило сократить уровень смертности от инвазивной карциномы шейки матки на 50-70%.

Поскольку цервикальное цитологическое исследование представляет собой скрининговое исследование, все обнаруженные патологии должны подтверждаться гистологическим исследованием.

Для точности диагноза по мазкам Папаниколау крайне важно соблюдать процедуры отбора и приготовления образцов. Для полной точности чрезвычайно важна рандомизация и равномерный отбор части образца.

Традиционная процедура взятия мазка по Папаниколау не предусматривает перемешивания образца перед приготовлением микропрепарата. Поскольку клетки на устройстве для взятия проб погружены в слизь, те клетки, которые переносят на микропрепарат, могут не быть репрезентативной выборкой всех клеток взятого мазка.

Клетки переносятся на предметное стекло в зависимости от того, в каком месте устройства для взятия проб они находились. Много клеток остаётся на устройстве для забора проб.

Неоднородность типичного образца цервикального мазка ведёт к тому, что мазки, приготовленные традиционным способом, трудно готовить, исследовать и интерпретировать.

Часто большие области микропрепаратов, приготовленных традиционным способом, покрыты примесями, клетками воспаления и пластинами эпителиальных клеток, которые могут скрывать ценный диагностический материал.

Кроме того, если мазок не зафиксирован немедленно после приготовления, клеточная морфология может исказиться по мере высыхания (воздушные артефакты).

Описываемый метод представляет собой метод для превращения жидкой суспензии взятого мазка цервикальных клеток в равномерно окрашенный гомогенный микропрепарат SurePath® без разрушения скоплений клеток, необходимых для диагностики.

Процесс включает консервацию клеток, их рандомизацию, обогащение диагностического материала, пипетирование и осаждение для создания клеточного препарата.

Полученный в результате этого процесса микропрепарат может использоваться для обычного цитологического скринингового исследования и категоризации по классификации Бетесда.

Как подготовиться к ПАП-тесту?

Цитологическое исследование проводится всем женщинам в возрасте от 18 до 30 лет раз в год. Пациенткам в возрасте 30 до 65 лет ПАП-тест проводится раз в 3-4 года.

Другими показаниями к проведению ПАП-теста (иногда даже в ежегодном порядке) являются:

  • Постоянная смена сексуальных партнеров;
  • ВПЧ-инфекция, ЗППП в анамнезе;
  • Начало половой жизни в очень раннем возрасте;
  • Ослабленная иммунная система (например, после химио или радиотерапии);
  • Курение;
  • Наличие в семейной истории болезни раковых заболеваний.

Если женщина игнорировала походы к гинекологу долгие годы, то мазок может быть проведен уже во время беременности. Это несет определенную угрозу вынашиванию плода, поэтому стоит сдать все стандартные анализы за 2-3 месяца до планируемого зачатия.

Получение максимально точных результатов мазка из цервикального канала зависит не только от специалиста, совершающего забор материала, лаборанта, но и самой пациентки.

Половые акты запрещены в течение 24 часов до проведения исследования, поскольку естественная и искусственная смазка, сперма могут затруднить забор «чистого» образца.

Утром, перед походом к врачу.

Обмыть лишь наружные половые органы (избегать приема ванны в положении сидя или лежа).

Если была поставлена внутриматочная спираль или вагинальное кольцо.

То необходимо за 1,5-2 недели до обследования дополнительно посетить врача для принятия решения о возможности взятия мазка.

За 4 дня до посещения гинекологического кабинета.

Отказаться от применения любых вагинальных препаратов (свечей, мазей).

Если молодой девушке предстоит впервые делать ПАП-тест, то нужно заранее посетить гинеколога для получения подробной устной консультации. Это позволит морально подготовиться к процедуре.

Принципы методики

Метод жидкостной цитологии представляет собой процесс приготовления клеточных препаратов цервикальных клеток на жидкой основе.

Гинекологические образцы собираются квалифицированным медицинским персоналом с помощью приспособления типа «метёлка» (например, Cervex Brush®) или эндоцервикального комбинированного устройства типа щёточки-шпателя (например, Cytobrush® Plus GT или Pap Perfect® компании MedScand (USA) Inc.

) со съёмными головками. Головку устройства снимают с ручки и помещают во флакон с жидким консервантом SurePath® Preservative Fluid. Флакон закрывают пробкой, прикрепляют этикетку и отправляют в сопровождении соответствующих  документов в лабораторию для обработки.

В лаборатории законсервированный образец перемешивают путём встряхивания, а затем переносят в пробирку с PrepStain® Density Reagent (плотным реагентом).

Стадия обогащения, состоящая из осаждения препарата на центрифуге через плотный реагент, частично удаляет из препарата ненужные для диагностики примеси и избыточные клетки воспаления.

После центрифугирования пробирку с обогащённым клеточным компонентом восстанавливают деионизированной водой, и клеточный материал ресуспендируют с помощью пипеточного дозатора путём последовательного отбора и выпуска жидкости.

Затем материал образца переносится в PrepStain® Settling Chamber (осадочную камеру), помещённую на предметное стекло SurePath® PreCoat. Клетки осаждаются под действием силы тяжести в течение короткого периода инкубации.

Избыточный материал сливают. Микропрепарат SurePath® PreCoat окрашивают, осветляют и накрывают покровным стеклом. Клетки располагаются в круге диаметром 13 мм.

Ограничения

  • Гинекологические образцы для приготовления препаратов, получаемых с помощью ручного метода, должны собираться с помощью одобренного устройства типа «метёлка» в соответствии со стандартной процедурой взятия мазка, определённой производителем.
  • Приготовлением и исследованием препаратов TriPath Imaging®, Inc. на жидкой основе могут заниматься только лица, прошедшие обучение в компании TriPath  или иных организациях, уполномоченных компанией TriPath  на проведение подобного обучения.
  • Для обеспечения требуемой эффективности устройства следует использовать только материалы, поставляемые или рекомендуемые компанией TriPath Imaging®, Inc. Использованные материалы должны быть надлежащим образом утилизированы в соответствии с нормативами организации и действующим законодательством.
  • Все материалы предназначены для одноразового использования и не могут быть использованы повторно.
  • Для выполнения цитологического исследования SurePath® на жидкостной основе требуется 8,0±0,5 мл образца, собранного в SurePath® Preservative Fluid Collection Vial (флакон для забора мазка с жидким консервантом).

Как проводится цитологическое исследование?

Мазок Папаниколау зачастую проводится в процессе гинекологического обследования на кресле. Это простой и быстрый тест. После разведения стенок влагалища с помощью зеркала, гинеколог введет специальную щеточку в зев шейки матки.

После трех поступательных движений, специалист извлечет щеточку и переместит материал на предметное стекло или в контейнер со специальной жидкостью.

Женщины, сдающие мазок в частных клиниках, могут попросить провести процедуру на кушетке. Для большего психологического комфорта, нижнюю часть тела прикрывают непрозрачной бумажной простынкой.

Еще одним преимуществом сдачи мазка в частной клинике является индивидуальный подбор размера применяемого шпателя или щеточки. Так, например, в период менопаузы стенки влагалища сужаются, а в цервикальном канале практически нет смазки, и применение щеточки стандартного размера может сделать процедуру болезненной.

Предупреждения

  • Жидкий консервант SurePath® Preservative Fluid содержит водный раствор денатурированного этилового спирта и не предназначен для употребления внутрь. Смесь содержит небольшие доли метилового и изопропилового спиртов, которые при приёме внутрь могут быть опасны для здоровья и привести к слепоте.
  • Плотный реагент PrepStain® Density Reagent содержит азид натрия. Азид натрия может реагировать с медными и свинцовыми трубами, образуя высоковзрывчатые азиды металлов. При утилизации смойте большим количеством воды, чтобы предотвратить накопление азида.

Что происходит с материалом после забора?

После забора, образцы передаются в лабораторию, где материал очищается и исследуется под микроскопом. Во многих региональных государственных больницах все еще используется традиционная онкоцитология шейки матки.

Образцы помещаются на специальное стекло, после чего очищаются в центрифуге, подкрашиваются специальным реагентом и исследуются под микроскопом. Недостатком традиционного метода можно назвать большой процент ложноотрицательных и ложноположительных результатов.

Расшифровка цитологического исследования материала, взятого из шейки матки традиционным методом, может быть затруднена из-за недостаточно тщательной очистки предметного стекла (по стандарту необходимо использовать новые стекла, но в государственных лабораториях стекла повторно применяются несколько десятков раз).

Также, предметное стекло поддается загрязнению инородными клетками во время транспортировки в лабораторию.

Жидкостную цитологию шейки матки повсеместно проводят в частных клиниках. После забора материала, врач перемещает щеточку в контейнер со специальной консервирующей жидкостью.

Сама работа с образцом проводится не вручную, а в специальных машинах, которые отделяют кровь и искусственные частицы от клеток из шейки матки, а также формируют готовый для оценки цитопрепарат. Лаборанту останется лишь сделать вывод о качестве клеток.

  • SurePath® Preservative Fluid Collection Vial (флакон для забора мазка с жидким консервантом)
  • PrepStain® Density Reagent (плотный реагент)
  • PrepStain® Settling Chambers (осадочные камеры)
  • SurePath® PreCoat Slides (предметные стёкла PreCoat)
  • Центрифужные пробирки
  • PrepStain® Syringing Pipettes (шприц-пипетки)
  • Наконечники аспиратора
  • Центрифуга
  • Штативы для микропрепаратов
  • Модульный аспиратор (необязательно)
  • Лоток для обработки (необязательно)
  • Приспособление типа «метёлка» или эндоцервикальное комбинированное устройство типа щёточки-шпателя со съёмной головкой (головками) для взятия мазка
  • Устройство для встряхивания
  • Точные пипетки со съёмными наконечниками
  • Деионизированная вода (pH 7,5-8,5)
  • Изопропиловый спирт и химически чистый этиловый спирт
  • Реагенты для окрашивания
  • Осветляющее средство, среда для заливки и покровные стёкла

Меры предосторожности

  • Следует соблюдать указания по надлежащей лабораторной практике, а также все процедуры, рекомендованные при использовании метода жидкостной цитологии.
  • Все реагенты стабильны до истечения указанного срока годности при условии соблюдения рекомендованных условий хранения.
  • Бактериальная контаминация реагентов может привести к неправильным результатам.
  • Замена предметных стёкол SurePath® PreCoat на другие может привести к неоптимальным результатам.
  • Избегайте расплёскивания и распыления жидкостей. Используйте соответствующие средства защиты рук и глаз, а также защитную одежду.
  • Жидкий консервант SurePath® Preservative Fluid обладает бактерицидным действием и был проверен на действие против следующих микробов: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans, Mycobacterium tuberculosis и Aspergillus niger. Однако следует постоянно соблюдать универсальные меры предосторожности по обращению с биологическими жидкостями.

Результаты и интерпретация

В листе результатов (особенно если анализ сдавался в государственной лаборатории) может быть лишь несколько английских букв. В частных клиниках обычно добавляют краткое резюме на русском языке.

Так как между получением результатов и походом к врачу может пройти несколько дней, женщины пытаются расшифровать кодировку самостоятельно.

При традиционной цитологии, в лист результатов добавляется графа «качество материала». Оценка «удовлетворительно» означает, что дифференцированных (очищенных) клеток было достаточно для оценки их структуры.

Примечание «неудовлетворительно» указывает на сильное загрязнение образца. В таком случае пациентке придется пройти процедуру заново (но не ранее чем через месяц).

До 2001 года повсеместно использовалась пятиступенчатая оценка состояния клеток эпителия шейки матки. Такая система лишь описывала степень изменений, но не давала никакой информации по поводу морфологии клеток.

Расшифровка результата цитологического мазка по современной системе Бетесда.

Результат Расшифровка

NILM (Normal)

Норма, патологических изменений в клетках эпителия не обнаружено.

ASCUS

Атипия плоскоклеточного эпителия неопределенного характера

ASCH

Атипия клеток плоского эпителия, не исключающая наличие HSIL

HSIL

Высокая степень внутриэпителиального поражения

LSIL

Низкая степень внутриэпителиального поражения

AGC

Аномальные изменения в клетках железистого эпителия

AGUS

Атипия клеток железистого эпителия неопределенного характера

CIS

Карцинома на 0 стадии

CIN

Интраэпителиальная неоплазия

NOS

Изменения неуточненного характера

Однако в некоторых больницах все еще используется пятиступенчатая классификация Папниколау. Чтобы соотнести результат по нескольким классификациям, можно использовать следующую таблицу.

Различные классификации и их взаимосвязь.

Результат по системе Бетесда Результат по классификации Папаниколау Дисплазия Расшифровка

NILM1

I

Отсутствует

Норма

NILM2, ASCUS, ASCH

II

Реактивные изменения клеток / Наличие изменений неуточненного характера

Воспалительный процесс/ наличие инфекции/ (при выявлении койлоцитов: ВПЧ)

LSIL, HSIL

III

Интраэпителиальная неоплазия 1-2 степени

Дисплазия легкой/средней степени тяжести

HSIL, CIS

IV

Интраэпителиальная неоплазия 2-3 степени

Дисплазия средней степени тяжести/ предраковое состояние

CIS

V

Атипия

Подозрение либо ранняя стадия карциномы

  • К препаратам на жидкой основе, приготовленным по методу компании TriPath Imaging®, Inc., можно применять все диагностические критерии, применяемые в настоящее время в цитологических лабораториях для традиционных мазков по Папаниколау.
  • Любые патологические или сомнительные явления, обнаруженные при скрининговом исследовании, должны быть направлены патологу для ознакомления и диагноза. Любые мофологические изменения клеток важны и должны быть отмечены.

Отбор дополнительной аликвоты

Во флаконе для забора мазка с жидким консервантом доступен объём, достаточный для отбора до 0,5 мл однородной смеси клеток и жидкости для дополнительного тестирования перед выполнением теста SurePath® Pap (теста по Папаниколау). Оставшийся после отбора объём достаточен для теста по Папаниколау.

Несмотря на отсутствие свидетельств о влиянии отбора аликвоты из флакона для забора мазка с жидким консервантом на качество образца для цитологического исследования, в редких случаях в ходе этого процесса возможно неравномерное распределение соответствующего диагностического материала.

Если результаты исследования не соответствуют истории болезни пациента, медицинским работникам может потребоваться забор нового образца. Более того, цитологическое исследование решает клинические задачи, отличные от тестирования на заболевания, передающиеся половым путём (ЗППП), таким образом, отбор аликвоты может быть неприемлемым для некоторых клинических ситуаций.

При необходимости можно отобрать отдельный образец для тестирования на ЗППП вместо отбора аликвоты из флакона для забора мазка с жидким консервантом.

При отборе аликвоты из образцов с низкой насыщенностью клетками в SurePath® Preservative Fluid Collection Vial может остаться объём материала, недостаточный для выполнения теста SurePath® Pap (теста по Папаниколау).

Аликвоту следует отбирать перед выполнением теста SurePath® Pap. Допускается отбор только одной аликвоты из флакона для забора мазка с жидким консервантом до выполнения теста по Папаниколау, независимо от объёма аликвоты.

Методика

  1. Для обеспечения однородности смеси необходимо встряхивать флакон для забора мазка с жидким консервантом в течение 10-20 с. Затем в течение одной минуты следует отобрать аликвоту 0,5 мл.
  2. Наконечник пипетки для отбора аликвоты должен иметь аэрозольный барьер, а объём пипетки должен соответствовать объёму отбираемой аликвоты.
    Примечание. Не следует использовать серологические пипетки. Во избежание попадания загрязнений в SurePath® Preservative Fluid Collection Vial или в аликвоту необходимо соблюдать требования надлежащей лабораторной практики. Отбор аликвоты должен выполняться в соответствующем месте за пределами помещения, в котором выполняется амплификация.
  3. Визуально проверьте материал аликвоты в пипетке на наличие крупных твёрдых или полутвёрдых частиц. При обнаружении таких примесей в ходе забора аликвоты следует немедленно вернуть всю отобранную жидкость во флакон с образцом и отбраковать образец для дополнительного тестирования перед тестом по Папаниколау.
  4. Инструкции по обработке аликвоты в анализах амплифицированных ДНК BD ProbeTec™ CT QI и GC QI см. на листках-вкладышах в упаковках наборов для анализа, предоставленных их производителями.

Хранение

  • Жидкий консервант SurePath® Preservative Fluid без цитологических образцов может храниться при комнатной температуре (от 15 до 30 ºС) до 36 месяцев со дня изготовления.
  • Срок хранения SurePath® Preservative Fluid с цитологическими образцами – до 6 месяцев в холодильнике (от 2 до 10 ºС) или 4 недели при комнатной температуре (от 15 до 30 ºС).
  • SurePath® Preservative Fluid, содержащий цитологический образец для использования в анализах амплифицированных ДНК BD ProbeTec™ CT QI и GC QI может храниться и транспортироваться до 30 дней при температуре от 2 до 30 ºС перед переносом в пробирки для разбавления образца с целью проведения цитологических исследований на жидкостной основе анализах амплифицированных ДНК BD ProbeTec™ QI.

Процедуры

  1. После взятия мазка с помощью Cervex-Brush® компании Rovers или аналогичного устройства для взятия мазка снимите головку устройства с ручки и поместите во флакон с жидким консервантом. Закройте флакон пробкой, прикрепите этикетку и отправьте в лабораторию.
  2. После регистрации флаконов с образцами в лаборатории поместите каждый флакон в штатив для обработки в комплекте с маркированной центрифужной пробиркой, в которую заранее помещено 4 мл плотного реагента PrepStain® Density Reagent и маркированного SurePath® PreCoat Slides (микропрепарата PreCoat). Плотный реагент следует добавить в пробирку до того, как туда будет добавлен образец, иначе качество процедуры снизится.
  3. Энергично встряхните каждый флакон с образцом в течение 10-20 секунд.
    (Во флаконе для забора мазка с жидким консервантом доступен объём, достаточный для отбора до 0,5 мл однородной смеси клеток и жидкости для дополнительного тестирования. Оставшийся после отбора объём достаточен для теста по Папаниколау. Отбор аликвоты может производиться после встряхивания в ходе теста с жидким консервантом SurePath®.)
    – Перенесите образец с помощью дополнительного автоматического устройства PrepMate™ Automated Accessory и шприц-пипеток PrepStain® Syringing Pipettes. См. инструкции в руководстве по эксплуатации устройств PrepMate.
  4. Поместите пробирки в штативы центрифуги в порядке, указанном на диаграмме последовательности расположения в руководстве по эксплуатации (каждый штатив вмешает до 12 пробирок). Последовательность размещения пробирок очень важна. Должен соблюдаться баланс.
  5. При необходимости сбалансируйте центрифужные пробирки добавлением консервирующей жидкости и центрифугируйте образцы в течение 2 минут при 200 g.
  6. При использовании модульного аспиратора включите систему Easy Aspirator и установите давление 230±50 мм рт. ст. Наденьте на аспиратор системы Easy Aspirator чистые наконечники.
  7. Извлеките штативы центрифужных пробирок из центрифуги. Медленно опустите наконечники системы Easy Aspirator (или одноразовые пипетки для переноса) в центрифужные пробирки для удаления надосадочной фракции. По завершении устройство аспирации должно касаться верха пробирки. Между образцами промывайте наконечники аспиратора водой.
  8. Центрифугируйте пробирки в течение 10 минут при 800 g, чтобы сконцентрировать диагностический компонент в клеточный осадок на дне пробирки.
  9. Извлеките штатив с пробирками из центрифуги. Осторожно и быстро слейте жидкость в раковину. Держа штатив перевёрнутым, осторожно промокните пробирки фильтровальной бумагой так, чтобы клеточный осадок остался в пробирке.
  10. Пометьте предметное стекло PreCoat номером каждого образца, стараясь не касаться поверхности стекла. Поместите предметные стёкла в штатив и установите на каждое предметное стекло осадочную камеру. Положение каждого нумерованного предметного стекла PreCoat должно соответствовать положению соответствующей центрифужной пробирки.
  11. Добавьте 4 мл буферной деионизированной воды (pH 7,5-8,0) в каждую пробирку и хорошо перемешайте встряхиванием.
  12. Обрабатывая пробирки с образцами по одной, перемешивайте их встряхиванием и немедленно перенесите 800 мкл клеточной суспензии в соответственно пронумерованную осадочную камеру на предметном стекле PreCoat. Повторите операцию для каждого образца.
  13. Подождите 10 минут, чтобы произошло полное осаждение. После осаждения осторожно переверните лотки с предметными стёклами над раковиной, чтобы слить оставшуюся жидкость, и промокните лишнюю жидкость фильтровальной бумагой.
  14. Промойте каждую осадочную камеру 500 мкл денатурированного этилового спирта слейте жидкость. Повторите промывание спиртом, слейте лишнюю жидкость и промокните фильтровальной бумагой, держа образцы перевёрнутыми не менее 1 минуты.
  15. Удалите осадочную камеру.
  16. Окрасьте микропрепараты SurePath® и закройте их покровными стёклами.
Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Медицинский взгляд на еду
Adblock
detector