Анализы на туберкулез — Инфекционные болезни

Бактериоскопический метод

Бактериоскопический метод охватывает прямую бактериоскопию мазков из патологического материала, окрашенных по Цилю-Нильсену, бактериоскопию методом флотации, люминесцентную микроскопию, фазовоконтрастного микроскопию.

Бактериоскопическое исследование мокроты начинается с приготовления мазка. Для этого мокроты смешивают с раствором натрия гидроксида и центрифугируют для получения осадка.

Осадок стеклянными палочками переносят на предметное стекло. Вторым предметным стеклом его равномерно размещают: накрывают покровным стеклом. Препарат изучают под микроскопом.

Микобактерии окрашиваются по Граму положительно. Для выявления МБТ готовят мазок мокроты высушивают его, фиксируют над пламенем спиртовки, после чего окрашивают по Цилю-Нильсену.

Окраска производится сначала карболовым раствором фуксина. Микобактерии туберкулеза плохо воспринимают окраску, поэтому раствор фуксина наносят на препарат в большом количестве, подогревают над пламенем спиртовки до появления пара.

Затем краску сливают, препарат промывают в воде и обесцвечивают в 5% растворе серной кислоты или в смеси этилового спирта с раствором соляной кислоты.

При этом все бактерии и морфологические элементы мокроты, кроме микобактерий туберкулеза, бесцветные. Мазок промывают проточной водой, а затем наносят метиленовый синий на 1-2 мин.

После этого раствор краски сливают, мазок промывают и высушивают. Препарат изучают через иммерсионной систему микроскопа, для чего на препарат наносят каплю иммерсионного масла, чтоб создать одинаковую среду между линзой объектива и препаратом.

Метод окраски по Цилю-Нильсену позволяет выявить микобактерии туберкулеза в тех случаях, когда в 1см3 мокроты содержится около 5000 — 10000 МБТ при условии, если просмотрено 300 полей зрения.

Исследование мокроты следует проводить в течение трех дней подряд, а при отрицательном результате — применить метод флотации.

Кашель у больного

Биологическая роль кашля состоит в рефлекторной реакции, которая направлена на устранения любого препятствия в дыхательных путях. Основное физиологическое назначение кашля заключается в очищении бронхов.

Кашель при бронхите по своему характеру может быть сухим или влажным. Сухой кашель обычно протекает без отхождения мокроты, тогда как влажный характеризуется наличием отделяемого из бронхов.

Это происходит из-за накопления мокроты в бронхах, которая выходит естественным образом. Переход кашля их сухого во влажное состояние указывает на улучшение состояния больного и его скорое выздоровление.

Метод флотации

Он основан на том, что при встряхивании двух жидкостей с различным удельным весом легче жидкость всплывает на поверхность одновременно с микобактериями туберкулеза, находящихся в суспензии.

Суть методики заключается в том, что готовят водную суспензию с углеводородами (ксилол, бензол) и МБТ. На поверхность воды утечет сливкообразная пена с МБТ, которую отсасывают пипеткой и наносят на предметное стекло.

Слой пены на предметном стекле высушивают и наносят новый слой пены из колбы. Так наслаивают пену 5-6 раз, после чего мазок фиксируют и окрашивают по Цилю-Нильсену.

Основные компоненты отделяемого из дыхательных путей

Мокрота, отхаркиваемая при бронхите, представляет собой патологическое явление, поскольку физиологически заложено, что в норме отделяемое из дыхательных путей должно сглатываться незаметно для самого человека.

Патологическое отделяемое образуется в ответ на возникшее воспаление и вместе с ним из дыхательных путей выводятся погибшие клетки, находящиеся на слизистой оболочке, а также микробы.

При остром или хроническом бронхите мокрота представляет собой секрет (слизеобразный, стекловидный, жидкий и т. д.), образующийся в дыхательных путях и содержащий:

  • клетки иммунной системы;
  • клетки эпителия (плоский эпителий диагностического значения не имеет, а вот большое количество клеток мерцательного эпителия наблюдается при воспалительном процессе);
  • микроорганизмы;
  • частицы распада клеток и тканей;
  • мельчайшие пылинки;
  • компоненты крови, представленные плазмой и клетками (характерно при мокроте с кровью).

Фазово-контрастная микроскопия

Эффективным методом выявления микобактерий туберкулеза является люминесцентная микроскопия. Суть метода заключается в способности микобактерий туберкулеза, окрашенные специальными красителями (аурамин, родамин), светиться при облучении ультрафиолетовыми лучами.

Преимуществом метода люминесцентной микроскопии является возможность проведения исследований при меньших увеличениях микроскопа, обеспечивает просмотр в короткий срок большего количества полей зрения, чем при обычной микроскопии.

Возможность выявления микобактерий туберкулеза увеличивается на 10-15% по сравнению с обычной бактериоскопии и на 8% — по сравнению с методом флотации.

Используют люминесцентный микроскоп под малым увеличением. На темном фоне видны золотисто-желтые микобактерии туберкулеза.

Это единственный микроскопический метод исследования, позволяющий наблюдать микобактерии и их биологически измененные формы в живом состоянии. Для проведения такого исследования применяют специальное фазовоконтрастное устройство.

При цитологическом исследовании мокроты у больных туберкулезом легких оказывается незначительное количество нейтрофилов в стадии значительной дегенерации на фоне казеозного детрита, скопления мононуклеаров, гигантских клеток Пирогова-Лангханса, иногда эозинофилы.

В случаях, когда мокроты нет или она выделяется в очень малом количестве, больному назначают отхаркивающее микстуру или раздражающие ингаляции. Кроме того, в случаях, когда нет мокроты, исследуют смыв из бронхов.

Виды анализов

Пациентам с заболеваниями дыхательной системы могут быть назначены несколько видов анализов отделяемого из дыхательных путей:

  1. Общий анализ мокроты (второе название – клинический анализ). Смысл данного исследования заключается в том, что полученный материал (виде мазков) исследуется под микроскопом сначала в своем первоначальном виде (нативный мазок), а затем окрашивается и исследуется повторно. На первом этапе лаборант может оценить качество мокроты, наличие отдельных элементов (например, спирали Куршмана – образования из белка и клеточных элементов, характерные для астмы и бронхоспазма). На втором этапе в окрашенном мазке можно визуализировать клеточные элементы: лейкоциты, эритроциты, а также яйца гельминтов, бактерии (окрашенные по Граму) и разные волокна. При исследовании анализируются такие показатели, как вязкость, цвет, консистенция, запах.
  2. Цитологический анализ. Данное исследование применяется для выявления атипических клеток. Оптимально выполнять данный анализ 3-5 раз, тогда его достоверность повышается. Для исследования могут быть взяты смывы с бронхов при проведении бронхоскопии. При бронхите данный метод может быть использован в тех случаях, когда клиника заболевания требует дифференциального диагноза с опухолями бронхов.
  3. Исследование мокроты на ВК относится к специфическим и направлено на выявление микобактерии туберкулеза в исследуемом материале. Так как этот микроорганизм требует иной метод окраски мазка (по Цилю Нильсену), то материал собирается отдельно. Время сбора в данном случае более продолжительное (сутки). Все хронические бронхиты требуют проведения данного анализа для исключения специфического процесса (обычно трехкратно).
  4. Специфические методы исследования мокроты: ПЦР, ДНК-гибридизация, РИФ и другие. Выполняются для обнаружения конкретного вида возбудителя.
  5. Посев мокроты на микрофлору и чувствительность к антибактериальным препаратам. Выполняется для выявления конкретного возбудителя, способного расти на питательных средах, и определения спектра чувствительности-устойчивости.

Биологический метод

Проводить сбор материала желательно утром, сразу после сна. Перед сдачей мокроты нельзя завтракать, курить, принимать лекарства. Рот перед отхаркиванием можно прополоскать кипяченой водой.

В случае, когда мокрота отходит плохо, могут быть проведены, назначены лечащим врачом, ингаляции через небулайзер раствором амброксола («Лазолвана», «Амбробене»).

Как правило, после ингаляции отхаркивание происходит эффективнее. Вместо амброксола могут быть использованы раствор соды и щелочные минеральные воды, но опять-таки с разрешения лечащего врача. За день до сдачи анализа необходимо много пить.

Необходимо тщательно следить, чтобы в контейнер для сбора попала только мокрота, без слюны. Особенно это важно для анализов с посевом и определением чувствительности к антибактериальным препаратам.

Образец помещают в специальный герметичный флакон и плотно закрывают крышкой. Контейнеры для сбора можно применять либо стерильные, приобретенные в аптеке, либо прошедшие обработку из лаборатории.

Желательно, чтобы контейнер был из прозрачного материала, что позволит оценить внешний вид и количество слизи. Чтобы провести анализ, достаточно собрать 3-5 мл отделяемого.

Для подготовки к посеву мокроты, плеврального экссудата, цереброспинальной жидкости существует несколько методов предварительной обработки.

Метод Мазура заключается в обработке патологического материала 3-4 мл 2% раствором серной кислоты в стерильной пробирке. Пробирку встряхивают в течение 3 мин.

Метод Петрова: мокроты обрабатывается 4% раствором гидроксида натрия в течение 15 мин., А затем центрифугируется.

Это привитие патологического материала животным. Гвинейским свинкам или белым мышам в паховой участок или в брюшную полость вводят исследуемый материал в дозе 2-3 мл.

Для этого его сначала обрабатывают 3 8% раствором соляной кислоты, хорошо отмывают (иначе на месте введения может возникнуть некроз тканей, возможна даже смерть животного от воздействия кислоты).

Незагрязненную мочу и СМЖ можно прививать без предварительной обработки. При наличии в патологическом материале вирулентных штаммов МБТ ​​животного заболевают туберкулезом и погибают через 1-2 месяца после заражения.

Если МБТ масс ослабленную вирулентность, животное погибает позже или может совсем не погибнуть. В таких случаях животное забивают, и диагноз устанавливают после вскрытия, макро- и микроскопического выявления туберкулезных бугорков.

Диагноз можно поставить на основании прижизненного исследования увеличенного регионариого лимфатического узла или инфильтрата, возникший на месте инокуляции патологического материала.

В последние годы для дифференциации микобактерий используют метод газожидкостной хроматографии, основанный на высокой способности различных соединений (аминокислот, нуклеиновых кислот, жиров, углеводов и т. д.).

Исследование смыва из бронхов

Оно проводится врачом. Для этого больному натощак смазывают корень языка, заднюю стенку глотки и надгортанник 1% раствором дикаина. Затем гортанным шприцем вливают в трахею 5-10 мл изотонического раствора натрия хлорида.

У больного сразу возникает сильный кашель и введен изотонический раствор натрия хлорида выкашливается на чашку Петри. Также смыв из бронхов (БАС — бронхоальвеолярный смыв) получают с помощью БАЛ — бронхо-альвеолярного лаважа, который проводят при бронхоскопии.

В клинической практике МБТ нередко приходится проявлять в моче, кале, цереброспинальной и плевральной жидкости. Исследование мочи на МБТ проводят в тех случаях, когда в ходе исследования осадка в каждом поле зрения оказывается не менее 15 лейкоцитов.

Для выявления МБТ мочу многократно центрифугируют, наслаивая каждый раз новые порции с осадка мочи на предметное стекло. Мазок окрашивают по методу Диля-Нильсена.

Для исследования мочи по методу флотации дают ей постоять, затем 20-30 мл осадка обрабатывают, как обычно, без подогрева на водяной бане. Отсутствие МБТ в гнойной мочи и это не исключает наличия туберкулеза почек.

Исследование кала на МБТ следует проводить в случаях подозрения на туберкулез кишок. При этом надо помнить, что у больных, выделяющих МБТ и частично заглатывают мокроту, МБТ можно выявить при исследовании кала и за непораженных кишок, поскольку микобактерии туберкулеза устойчивы и не всегда погибают под воздействием пищеварительных соков.

Обнаружение МБТ в цереброспинальной жидкости нередко имеет решающее значение в диагностике туберкулезного менингита. Однако бактериоскопическим методом выявить МБТ удается только в 10-20% больных туберкулезный менингит.

Исследование проводится по следующей методике. Пробирку с цереброспинальной жидкостью ставят на 8-10 часов в прохладном месте. Если в ней образуется нежная фибринная пленка (она состоит из клеток и МБТ), ее наносят на предметное стекло и готовят препарат по методу Циля-Нильсена.

Для выявления МБТ в плевральном экссудате, пунктатах и выделении из свищей готовят препарат так же, как и при исследовании мокроты.

Бактериологическое исследование состоит из посева материала на питательные среды и дифференциации культуры МБТ от кислотоустойчивых сапрофитов. Этим методом можно обнаружить микобактерии туберкулеза, когда в 1 мл материала находится 20-100 микробных клеток.

Пробирки со средой помещают в термостат при температуре 37 ° С. Первые колонии микобактерий могут появиться на 18-30-й день, а иногда — через 2-3 месяца.

Посев исследуемого материала производится на специальные среды после предварительной обработки. Чаще всего используют такие среды: Левенштейна-Йенсена, Финна-2, Миддлбрука, Огава и др.

, которые содержат вещества, задерживающие рост посторонних микроорганизмов. Предварительная обработка патологического материала заключается в уничтожении сопроводительной бактериальной флоры.

Оценка результатов

Расшифровку результатов может делать только квалифицированный специалист, основываясь также на данных осмотра и клиники заболевания. В норме объем трахеобронхиального секрета составляет от 10 до 100 мл в сутки, который здоровый человек проглатывает незаметно для себя.

Возможные отклонения при проведении анализа:

  • прозрачное и вязкое отделяемое характерно при вирусном поражении дыхательных путей;
  • янтарного цвета – признак аллергического характера болезни;
  • зеленый, желтый, коричневый оттенки или с кровью – указывают на бактериальный воспалительный процесс, возможную деструкцию;
  • мокрота с кровью также может свидетельствовать о кровотечении, в норме в отделяемом обнаруживаются лишь единичные эритроциты;
  • если в мокроте содержится свыше 10-20 лейкоцитов, то это указывает на наличие инфекционного (бактериального, вирусного, реже грибкового) воспаления;
  • наличие свыше 50-95% эозинофилов говорит об аллергическом характере болезни;
  • присутствие эластичных волокон является опасным признаком, который появляется при разрушении легочной ткани: туберкулезе, абсцессе, раке, гангрене легкого;
  • коралловидные волокна обнаруживаются при туберкулезном процессе (каверны);
  • спирали Куршмана и кристаллы Лейдена могут обнаруживаться при астме, а также при бронхоспазме и бронхообструкции, реже при других патологических состояниях;
  • альвеолярные макрофаги, как правило, характеризуют хронический процесс, при остром воспалении их немного;
  • выявление кокков, диплококков, палочек, грибов и других микроорганизмов в общем анализе свидетельствует на фоне увеличения числа лейкоцитов об инфекционном воспалительном процессе.

Таким образом, по анализу отделяемого, приведенного на рисунке выше, можно предполагать какой-либо процесс в бронхиальном дереве, сопровождающийся умеренно-выраженой деструкцией тканей с небольшим кровотечением, скорее всего, деструктивный бронхит, туберкулез или опухоль бронха.

Характеристики мокроты

Характеристики мокроты, доступные для оценки в домашних условиях, приведены в таблице ниже. Помимо этого, всегда стоит оценить количество мокроты и легкость ее отхождения.

Цвет отделяемого Консистенция Запах
Напрямую от стадии болезни и количества компонентов, входящих в состав слизи, будет зависеть цвет мокроты Выделяемая мокрота может быть жидкой, вязкой или густой. По характеру может быть слизистая, гнойно-слизистая и слизисто -кровянистая. Чаще всего не имеет запаха.
Белый цвет мокроты принято считать нормой. Но при появлении избыточного количества прозрачной мокроты необходимо сдать анализ, так как этот симптом может появляться при хроническом бронхите, отеке легких, туберкулезе или астме. Мокрота белого цвета практически всегда имеет жидкую консистенцию. Не имеет запаха
Появление мокроты желтого цвета указывает на присутствие в составе слизи нейтрофилов. Присутствие этих клеток может указывать на инфекционный процесс. Поэтому при остром бронхите мокрота может приобрести желтый цвет. Представлена вязкой или жидкой массой Возможно появление неприятного или резкого запаха.
Зеленый цвет отделяемого возможен при хроническом содержании инфекции, запущенной бактериальной инфекции. Зеленая мокрота может содержать гной, причем в большом количестве. Представлена вязкой или жидкой массой. Возможно появление неприятного или резкого запаха.
Появление коричневой или черной мокроты свидетельствует о распаде эритроцитов и является показателем «старой крови», оставшейся после ранее имевшихся кровотечениях. Этот оттенок возможен при хроническом бронхите и требует незамедлительного квалифицированного лечения. Обычно густая Может иметь запах несвежей крови.
Признаком наличия эритроцитов (вероятное наличие диапедеза эритроцитов или кровотечения) является окрашивание мокроты в розовый или красный цвет. Эритроциты в небольшом количестве попадают в мокроту вследствие «пропотевания» через сосудистую стенку расширенных капилляров. В большом количестве обнаруживаются при распаде тканей с вовлечением в процесс деструкции сосудов. Мокрота с кровью является сигналом об опасности и требует немедленной медикаментозной консультации. Сгустки, жидкая, либо пенистая. Без запаха или имеет запах свежей крови.

При остром бронхите отделяемое не имеет запаха и прозрачно (основной инфекционный агент при остром бронхите – вирусы). При отсутствии адекватного лечения бронхита мокрота может изменить свой цвет, приобретая желтоватый или зеленоватый оттенок.

В этом случае можно говорить о присоединении бактериальной инфекции. Самым настораживающим признаком является появление крови в отделяемом из дыхательных путей, которое может указывать на осложнения, распад и требует срочного лечения.

Важно понимать, что если на протяжении недели наблюдается кашель с отделяемым желтого, зеленого, коричневого цвета или с кровью, то необходимо обратиться за помощью к врачу.

Ускоренные методы поиска микобактерий

К ускоренным методам обнаружения микобактерий принадлежат выявления МБТ с помощью индикаторной пробирки ВВL МОИТ. Рост микобактерий туберкулеза происходит в течение 4-10 суток.

Пробирки ВВL МОИТ содержат бульон и флуоресцентное соединение, реагирует на кислород, растворенный в бульоне. Исходная концентрация кислорода не дает яркого свечения.

При поглощении кислорода культурой МБТ наблюдается яркая флуоресценция на дне пробирки. Такой результат считают положительным. Если флуоресценции нет или она незначительна — результат отрицательный.

В последнее время для диагностики туберкулеза используют иммуноферментные и молекулярно-генетические методы.

Молекулярно-генетические методы

Появились методы идентификации МБТ с помощью моноклональных антител, полученных способом гибридомной технологии. Сейчас существует более 100 моноклональных антител к эпитопам основных антигенов МБТ.

Применение этих антител в иммуноферментном анализе дает возможность очень быстро дифференцировать вид возбудителя, но пока метол используется в научных разработках для идентификации возбудителя туберкулеза, который чаще всего встречается.

Среди молекулярно-генетических методов диагностики туберкулеза чаще всего применяется метод ДНК-зондов и полимеразной цепной реакции (ПЦР). В основе этих методов лежит принцип комплементарности нуклеотидных оснований в построении двуспиральной молекулы ДНК.

При проведении ДНК-зондирования в случае наличия в пробе исследуемого специфического участка ДНК микобактерий образуется гибрид (двухцепной фрагмент) ДНК исследуемого и ДНК-зонда.

В основе приципа ПЦР лежит многократное увеличение фрагмента ДНК. Для амплификации (многократного удвоения гена бактерий) требуется наличие двух праймеров (затравок) — небольшого одноцепочечного фрагмента ДНК, что соединяется с комплементарной участком одной из цепей матричной ДНК.

В дальнейшем происходит достройка этой цепи ДНК-полимеразой. Увеличение количества (в 106 раз) фрагмента амплифицируемого оказывается электрофорезом в агаровом геле.

ДНК-зондирование позволяет проводить определение микобактерий в диагностическом материале в течение 2-4 суток, а ПЦР — за 4-6 ч. с максимально высокой чувствительностью методов — 10-100-1000 клеток в пробе исследуемого.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Медицинский взгляд на еду
Adblock
detector