Цитологическое исследование кожи у собак — АНТИ-РАК

Цитологическое исследование кожи у собак

Цитологическое исследование является важнейшим способом диагностики здоровья домашних животных, с целью исключения или подтверждения опасности новообразований в организме питомца.

Во время проведения цитологии данного анализируется состояние крови, ткани слизистых оболочек, кожи, а также изучаются новообразования. Однако цитологическое исследование несколько отличается от гистологического – направленного исключительно на выявление злокачественности образований.

Цитологический анализ крови, выпотных жидкостей и Гистологический анализ опухоли у животных является одним из основных методов в Ветеринарной диагностике.

На первый взгляд техника сбора материала для анализа предельно проста. Тем не менее для правильной диагностики необходимо соблюдение нескольких несложных правил, которые помогут морфологу поставить правильный диагноз.

Чистые одноразовые стекла

Иглы диаметром 18-22Ø

Стерильные контейнеры(если объем жидкости превышает 10 мл)

Желательно использование 5% раствора цитрата натрия либо ЕДТА для предотвращения свертывания материала

Мазки-отпечатки: для цитологического исследования могут быть приготовлены взятием с наружных покровом у живых животных или тканей взятых в процессе операции или некроскопии.

Их легко получить и они требуют минимум навыков, но при таком методе получается меньше клеток чем при соскобе и присутствует большая степень инородных примесей в виде бактерий и прочих клеток, чем при сборе пунктата.

Как результат-зачастую мазки-отпечатки отражают лишь вторичную бактериальную инфекцию или дисплазию тканей, вызванную воспалительным процессом. Также важно учесть что при сборе материала с язвенной, воспаленной поверхности брать отпечаток необходимо ДО ОЧИСТКИ поверхности.

Соскобы с ткани: такому методу взятия материала свойственно сбор большого количества клеточного материала, это особенно важно когда в качестве материала выступает твердая ткань, содержащая мало клеток(например костная ткань, либо кальцификат ткани).

Смывы для цитологического исследования в ветеринарной диагностике используются в основном для исследования влагалищных мазков на овуляцию. После взятия материала стерильным урогенитальным зондом необходимо аккуратными плавными движениями повращать по стеклу и отправить в лабораторию.

-получить клетки необходимого типа

-получить клетки в любом количестве

-устраняет бактериальную загрязненность

-можно получить в том числе и с внутренних органов, под контролем УЗИ.

-устраняет загрязнение материала кровью и другими тканями.

При использовании любого метода следует учесть что клеточный материал должен хранится при температуре 4 — 7 °С

-Наличие избытка периферийной крови приводит к разбавлению клеток и делает материал неинформативным. Причинами появления избытка крови как правило являются использование слишком крупныхигл, либо слишком большое погружение иглы в ткань, либо слишком долгое её там нахождение.

-Критичным является этам нанесения материала на стекло. Материал должен быть нанесен на стекло сразу же после взятия для предотвращения его высыхания и образования клеточного сгустка.

Особенности цитологии

Цитологический анализ примечателен тем, что он является исследованием с наименьшим вмешательством в организм животного. Однако данный анализ позволяет обнаружить какие либо аномалии в строении и функционировании клеток.

Цитологическое исследование домашнего животного проводится для возможности обнаружить нетипичны воспалительные и бактериальные клетки, паразитов и грибки.

Показаниями для проведения цитологического анализа кожи у собак служат:

    гнойные высыпания; кожный зуд; выпадение или неравномерный рост шерсти; появление на коже корки.

Забор необходимого материала для исследования практически не вызывает болезненных ощущений у питомца. Получение образца ткани для исследования происходит при помощи иглы или специального инструмента – трепана.

Исследование выполняется непосредственно после взятия материала.

Необходимо отметить, что диагноз «наружный отит» основывается на данных анамнеза, клинических признаках и результатах отоскопии, при этом цитологическое исследование является важным инструментом, позволяющим установить природу экссудата, что оказывает помощь в выявлении вероятных причин отита и факторов, поддерживающих воспалительный процесс.

Цитология редко проводится при отсутствии клинических признаков патологии ушного канала (зуд, эритема, выделения и т. д.), однако эти данные необходимы нам для понимания патологии в дальнейшем.

В норме, в наружном ухе присутствует сера в небольшом количестве как продукт модифицированных апокриновых (церуминозных) и сальных желёз. Тонкий слой серы формирует защитный барьер, предотвращающий воздействие микроорганизмов и влаги.

В связи с преобладанием липидов в материале, он плохо окрашивается. Ушная сера содержит также слущенные клетки рогового слоя эпидермиса и резидентные микроорганизмы.

Слущенные клетки эпидермиса всегда присутствуют в некотором количестве, при окрашивании они приобретают слабобазофильную окраску. Кератиноциты могут содержать гранулы меланина, которые выглядят как круглые или овальные структуры желтого или коричневого цвета.

В наружном ухе собак и кошек в норме присутствуют микроорганизмы, наиболее часто выделяют коагулазо-негативных и коагулазо-позитивных Staphylococcus spp.

, Streptococcus spp. В крайне редких случаях выделяют палочки и Corynebacterium у клинически здоровых животных (Kowalski J.J. 1988, Scott D.W. et al 2000, Harvey R.G. et al 2001).

В любом случае, обнаружение лейкоцитов и палочек в цитологических препаратах отделяемого из наружного уха является признаком отита и служит показанием для проведения терапии.

Кроме того обращают внимание на количество микроорганизмов — в большинстве случаев наблюдается идентичная цитологическая картина в мазках из обоих ушей, значительное отклонение в количестве микроорганизмов в левом и правом ухе должно настораживать.

Таблица 1. Ориентировочное количество микроорганизмов в поле зрения микроскопа с использованием объектива х40 (Gotthelf Louis N. et al. Small animal ear diseases: second edition. USA. 2005)

микроорганизмы

норма

промежуточное значение

патология

Malassezia

собаки

≤2

3 — 4

≥5

кошки

≤2

3 — 11

≥12

бактерии

собаки

≤5

6 — 24

≥25

кошки

≤4

5 -14

≥15

Диаметр большинства кокков составляет 0,3 мкм, длина палочек не превышает 1,5 мкм, поэтому оценку бактериальной флоры предпочтительнее проводить с использованием объективах40 или х100.

В одном отчёте (Clinkenbeard K.D. et al, 1995), посвященном исследованию нормальной флоры наружного уха, описано, что грамм-положительные кокки были выявлены у 42% собак при цитологии и лишь у 25% собак при культуральном исследовании.

Это доказывает, что проводить культуральные исследования имеет смысл только после обнаружения признаков инфекционного процесса по цитологии. Иными словами, отсутствие роста бактерий in vitro не исключает наличие инфекции, а выявление микроорганизма в бактериологии не доказывает наличие воспаления.

Однако только бактериология может помощь в случае множественной резистентности к антибиотикам (см. таблицу 2). Чаще всего обнаруживаются крупные кокки, расположенные парами, тетрадами и группами, которые чаще всего являются Staphylococcus spp;

мелкие кокки, иногда собирающиеся в короткие цепочки –Streptococcus и Enterococcus spp. Изредка можно обнаружить как в норме, так и при отите Corynebacterium – крупные округлые палочки.

Наиболее часто встречающимися патогенными палочками являются Pseudomonas spp. and Proteus spp. причём у собак, живущих в жарком климате, эти палочки часто обнаруживают в здоровых ушах.

В дополнение к морфологическим исследованиям необходимо провести полуколичественный подсчёт. В таблице 1 приведены приблизительные данные оценки количества микроорганизмов при использовании объектива х40.

По мнению других авторов (Ginel et al , 2002) – при использовании объектива х100 в норме присутствует 2 бактерии, а более 10 в поле зрения является патологией у собак и, соответственно, 1,6 и 6 для кошек.

В своей практике, автор предпочитает проводить исследование с использованием иммерсионного объектива х100.

Важно различать термины «перерост микрофлоры» и «инфекция». Под термином «перерост» подразумевается увеличение числа резидентных микроорганизмов в дебрисе и на поверхности эпителия наружного уха.

Клинически, перерост может имитировать отит, поскольку микроорганизмы выделяют экзотоксины и вызывают раздражение. Однако, при переросте не требуется типизация микроорганизмов, подбор антибиотиков для системной терапии.

Более того, системная терапия при переросте менее эффективна, чем использование местных средств (обычно, сочетание механического удаления дебриса путём промывания с местной противовоспалительной и антимикробной терапией).

К бактериальной инфекции относят случаи гнойного воспаления в ответ на внедрение возбудителя, приводящего к нарушению эпителия, его эрозированию и изъязвлению, а такжже колонизации тимпанической полости.

Эти случаи требуют долгой высокодозной системной антибиотикотерапии. Бактериальный перерост не распространяется на среднее ухо, в цитологии отсутствуют лейкоциты.

Таким образом, только цитологическое исследование позволяет отличить нормальную микрофлору, перерост и бактериальную инфекцию, несмотря на то, что все эти состояния могут быть вызваны одними и теми же бактериями.

Сравнительная характеристика цитологии и бактериологии приведена в таблице 2. Очевидно, что в резистентных случаях наружного отита бактериология оказывается полезной, поскольку дает представление о чувствительности к антибиотикам.

Однако определение чувствительности/резистентности микроорганизмов основывается на минимальной ингибирующей концентрации антибиотика в крови, способной воздействовать на бактерии.

Основу терапии наружного отита составляет топикальная (местная) терапия, при этом высокая концентрация препаратов в очаге воспаления позволяет преодолеть порог резистентности.

Кроме того, обнаружение 4 — 5 видов бактерий в экссудате, чувствительных к разным антибиотикам, при рутинном бактериологическом исследовании вводит в заблуждение врача в начале лечения.

Таблица 2. Сравнение цитологического и бактериологического методов (Gotthelf Louis N. et al. Small animal ear diseases: second edition. USA. 2005)

признак

цитология

бактериология

минимальное время, необходимое для исследования

быстро

48 – 72 часа

чувствительность (дрожжи)

высокая

низкая

чувствительность (бактерии)

высокая

от умеренной до высокой

чувствительность (лейкоциты)

высокая

нет

возможность количественной оценки

полуколичественная

точные данные

значимость при смешанной инфекции

да

низкая

мониторирование ответа на лечение

да

нет

определение антибиотикорезистентности

нет

да

Другим микроорганизмом, в норме присутствующим в наружном ухе, является базофильно окрашенный дрожжеподобный гриб Malassezia, который в цитологических препаратах легко узнаваем по характерной форме «матрёшки» или «земляного ореха».

Размер Malassezia составляет 2 – 4 мкм х 6 – 7 мкм (в качестве приблизительной линейки можно использовать эритроциты – диаметр эритроцита кошки составляет приблизительно 5 мкм, собаки – 7 мкм).

Несмотря на то, что этот микроорганизм собак и кошек относится к резидентной флоре, при чрезмерном размножении он становится важным патогеном-оппортунистом, приводящим к отиту с ярко выраженной клинической картиной.

Поскольку микроорганизмы в норме присутствуют в слуховом канале в некотором количестве, необходимо видеть разницу между нормой и патологией. Обычно полуколичественную оценку микроорганизмов-оппортунистов проводят на основании микроскопии препарата на большом увеличении (под иммерсией).

В литературе имеются разные данные о нормальной микрофлоре наружного уха у собак и кошек. Понятие «поле зрения» в разных моделях микроскопа может сильно отличаться, а количество обнаруженных микроорганизмов зависит от толщины мазка, данные о количественной оценке микрофлоры наружного уха отличаются у разных авторов.

Поэтому оценку эффективности лечения возможно проводить только при условии, что материал был получен одинаковым образом. В исследовании Tater K.C. с соавторами (2003), проводившими цитологическое исследование у 50 здоровых собак и 52 здоровых кошек, при микроскопии (объектив х40) в поле зрения было выявлено от 0 до 2,6 дрожжей у собак и от 0 до 3,3 у кошек, при этом не выявлено достоверной разницы в количестве микроорганизмов у животных со стоячими и висячими ушами.

Другими грибами, выделенными при наружном отите, являются Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon, Saccaromyces. Candida albicans относится к резидентной флоре кожи и желудочно-кишечного тракта у собак и кошек.

При определённых обстоятельствахэтот дрожжеподобный гриб становится патогенном-оппортунистом. В отличие от Malassezia, Candida spp. является редкой причиной патологий ушей.

В одном исследовании (Ginel et al, 2002) у трёх из 24 собак (12,5%) и двух из 22 кошек (9,1%) с клиническими признаками наружного отита была обнаружена Candida spp.

Цитологически Candida spp. выглядит как тонкостенный, округло-овальный микроорганизм, размером 2-6 мкм, имеющий тонкую, полупрозрачную капсулу, отталкивающую краску, благодаря которой создаётся ареол вокруг этого дрожжеподобного гриба. Candida spp.

может образовывать короткие, тубулярные или септированные псевдогифы, в отличие от Malassezia, которая не имеет капсулы и никогда не образует гифы и псевдогифы.

Обнаружение Candi spp. в цитологии из ушей всегда говорит о наличии инфекции и требует проведения противогрибковой терапии (Gotthelf L. N. et al. 2005)

Бактериальный/дрожжевой перерост

Обнаружение в среднем 3-5 кокков или Malassezia в одном поле зрения при большом увеличении (объектив х100) свидетельствует о бактериальном/дрожжевом переросте.

Это промежуточное состояние между нормой и отитом, характеризуется увеличением числа микроорганизмов в ответ на изменение свойств ушной серы. Это может быть связано с повышением влажности в слуховом канале, аллергической реакцией, попаданием воды в ухо и т.п.

При своевременном устранении этих причин, ситуация обратима. Бактериальному/ дрожжевому переросту способствуют морфологические изменения слухового канала, приводящие к плохой вентиляции и нарушению эпителиальной миграции.

Церуминозный отит

Если в мазках присутствует кератинизированные эпителиальные клетки в большом количестве или непрокрашенные сальные массы и при этом встречаются единичные микроорганизмы, нужно сделать заключение о церуминозный неинфекционном отите.

Причиной церуминозного отита являются повышенная секреция серных и сальных желез, а также наличие гиперплазии, кист и новообразований в слуховом канале.

В скопившейся в большом количестве сере размножаются бактерии и дрожжи, присутствующие там в норме. В большинстве случаев наружного отита воспалительная реакция и эпидермальная гиперплазия сужают пространство наружного уха, что ещё усиливает воспаление.

В случаях, когда это состояние не удаётся купировать при помощи противовоспалительной терапии, методом выбора является хирургическое лечение. Причиной себорейного отита могут быть первичные нарушения кератинизации у собак некоторых пород (бассет-хаунд, ирландский сеттер, шар-пей, немецкая овчарка и другие).

В норме в ушном канале у собак эпителий проходит полный цикл приблизительно за 22 дня, включая процессы пролиферации, дифференциации и десквамации. При первичной идиопатической себорее, например, у американских коккер-спаниелей, весь цикл составляет 8 дней, что приводит к скоплению церумена в слуховом канале и развитию церуминозного отита.

Лечение должно быть направлено на устранение, по возможности, первичных причин. Необходимо также контролировать секрецию желёз и вторичную инфекцию. Эффективной мерой может оказаться регулярная очистка слухового канала при помощи церуминолитических средств (растворяющих серу), содержащих пропиленгликоль, глицерин, минеральное масло и др.

По данным научных исследований, эффективность системного применения кортикостероидов, цитостатиков, ретинойдов при церуминозном отите сомнительна (Mueller Ralf S., 2000; Scott D.W. et al 2000; Gotthelf L.N., 2000; Harvey R.G. et al 2001).

Поскольку местная терапия стероидными препаратами оказывает противовоспалительное, антимитотическое, катаболическое действия, снижает эпителиальную пролиферацию и секрецию желёз, по мнению автора, их топикальное применение вполне обоснованно, по крайней мере, в период обострения воспаления.

Гнойный отит

При гнойном отите материал представлен дебрисом, разрушенными лейкоцитами, иногда содержащими внутриклеточные микроорганизмы, кокки и/или палочки.

Основным инструментом, позволяющим дифференцировать перерост от инфекции, является наличие лейкоцитов, свидельствующее о наличии воспаления (отита). Важным моментом является обнаружение фагоцитированных бактерий, что особенно часто сопутствует микстинфекции.

В большинстве случаев, незавершённый фагоцитоз наблюдается при сопутствующем среднем отите вследствие просачивании экссудата из среднего уха в слуховой канал.

https://www.youtube.com/watch?v=VVF2On0Ac0c

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Медицинский взгляд на еду
Adblock
detector