Процесс подготовки клеток для гинекологических исследований

Назначение

Используется для диагностики in vitro.

Метод представляет собой процесс приготовления клеточных препаратов на жидкой основе. Он призван заменить традиционный метод приготовления микропрепаратов мазков по Папаниколау, применяющихся в скрининговых исследованиях для выявления рака шейки матки.

Средой для сбора и транспортировки гинекологических образцов, тестируемых в анализах амплифицированных ДНК BD ProbeTec™ Chlamydia trachomatis (CT) QI и Neisseria gonorrhoeae (NG) QI, является жидкий консервант SurePath® Preservative Fluid.

Инструкция по использованию SurePath® Preservative Fluid для подготовки образцов, используемых в этих анализах, см. на листках-вкладышах в упаковках наборов для анализа.

Введение

В настоящем стандарте реализованы основные нормативные положения документа [1].Стандарт разработан для внедрения в практику здравоохранения унифицированных алгоритмов и методов ранней диагностики опухолей человека с целью оптимизации и систематизации деятельности лечебно-профилактических учреждений и специалистов в области раннего выявления и ранней диагностики рака;

для эффективной и своевременной диагностики и лечения, что повлечет за собой увеличение выживаемости, снижение смертности, будет способствовать масштабной борьбе против рака на глобальном, региональном и национальном уровнях, укреплению системы здравоохранения на всех уровнях;

для улучшения доступности диагностики и лечения для пациентов, страдающих онкологическими заболеваниями.Также стандарт может быть использован учреждениями здравоохранения и органами государственной власти при создании нормативных правовых актов.

Программа скрининга рака шейки матки широко признана как одна из самых успешных программ профилактики рака в мире. После внедрения в 1988 г. в Великобритании программы всеобщего скрининга рака шейки матки было отмечено прогрессирующее снижение смертности от этого заболевания.

Характерное для рака шейки матки медленное прогрессирование от самых ранних его стадий до инвалидизирующего рака предоставляет широкие возможности для проведения его ранней диагностики и лечения.

Для адекватного выполнения диагностических и лечебных мероприятий, правильной интерпретации исследований, а также для эффективной синхронизации при взаимодействии медицинских работников любых уровней, лечебных учреждений, специализаций и стран необходимо знание и единое понимание целей, задач, возможностей скрининга, правил его организации и алгоритмов проведения на всех этапах, единое знание и понимание анатомических, топографических и других медицинских терминов и классификаций, строгая отчетность и систематический контроль качества.

Краткий обзор и описание

Скрининговое исследование для выявления рака шейки матки с использованием метода Папаниколау (Pap) включает микроскопическое исследование экто- и эндоцервикальных клеточных образцов, нанесённых на предметные стёкла и окрашенных по методу Папаниколау.

Цервикальное цитологическое скрининговое исследование с помощью мазка по Папаниколау позволило сократить уровень смертности от инвазивной карциномы шейки матки на 50-70%.

Поскольку цервикальное цитологическое исследование представляет собой скрининговое исследование, все обнаруженные патологии должны подтверждаться гистологическим исследованием.

Для точности диагноза по мазкам Папаниколау крайне важно соблюдать процедуры отбора и приготовления образцов. Для полной точности чрезвычайно важна рандомизация и равномерный отбор части образца.

Традиционная процедура взятия мазка по Папаниколау не предусматривает перемешивания образца перед приготовлением микропрепарата. Поскольку клетки на устройстве для взятия проб погружены в слизь, те клетки, которые переносят на микропрепарат, могут не быть репрезентативной выборкой всех клеток взятого мазка.

Клетки переносятся на предметное стекло в зависимости от того, в каком месте устройства для взятия проб они находились. Много клеток остаётся на устройстве для забора проб.

Неоднородность типичного образца цервикального мазка ведёт к тому, что мазки, приготовленные традиционным способом, трудно готовить, исследовать и интерпретировать.

Часто большие области микропрепаратов, приготовленных традиционным способом, покрыты примесями, клетками воспаления и пластинами эпителиальных клеток, которые могут скрывать ценный диагностический материал.

Кроме того, если мазок не зафиксирован немедленно после приготовления, клеточная морфология может исказиться по мере высыхания (воздушные артефакты).

Описываемый метод представляет собой метод для превращения жидкой суспензии взятого мазка цервикальных клеток в равномерно окрашенный гомогенный микропрепарат SurePath® без разрушения скоплений клеток, необходимых для диагностики.

Процесс включает консервацию клеток, их рандомизацию, обогащение диагностического материала, пипетирование и осаждение для создания клеточного препарата.

Полученный в результате этого процесса микропрепарат может использоваться для обычного цитологического скринингового исследования и категоризации по классификации Бетесда.

1 Область применения

Настоящий стандарт разработан как руководство по организации цитологического скрининга рака шейки матки для специалистов в области организации здравоохранения, руководителей лечебно-профилактических учреждений и лабораторий, сотрудников цитологических, молекулярно-генетических, клинико-диагностических лабораторий и патологоанатомических отделений с целью своевременного выявления и постановки полноценного развернутого диагноза, снижения заболеваемости раком и смертности от него, а также для оптимизации и повышения экономической эффективности профилактических и лечебных мероприятий.

Настоящий стандарт распространяется на процедуры:- организации цитологического скрининга рака шейки матки;- получения материала для исследования в рамках цитологического скрининга;

— подготовки и доставки материала в лабораторию;- документального оформления на всех этапах;- дополнительные лабораторные исследования, осуществляемые с целью выявления патологии и установления диагноза.

Всемирная организация здравоохранения настоятельно рекомендует обратить особое внимание:- на организацию материально-технического обеспечения и укомплектованность кадрами;

— обеспечение соответствующего профессионального уровня сотрудников путем организации регулярного повышения квалификации для них и контроля качества диагностических мероприятий;

— обеспечение тесного контакта в рамках служебных взаимоотношений между сотрудниками путем организации регулярных встреч для обсуждения профессиональных вопросов и совместного обучения членов команды вне зависимости от их специализации.

_______________ Необходимо отметить, что борьба против рака шейки матки может быть эффективной только в случае, если в стране:- существует национальная политика борьбы с раком шейки матки, учитывающая природу этого заболевания, распространенность, зависимость от многих факторов, в том числе от возраста;

— выделено на государственном уровне финансирование этой национальной программы;- на государственном уровне в рамках программы национального скрининга поддерживаются и реализуются программы санпросвещения, осуществляется поддержка профилактических мероприятий;

— эти мероприятия проводятся систематически;- осуществляется контроль над деятельностью и контроль качества выполняемых исследований;- службы, проводящие исследования, находятся в тесном контакте с учреждениями, в которых, при необходимости, может проводиться дальнейшее обследование и лечение пациенток.

Приложение Д (рекомендуемое). Порядок исследования препарата и основные принципы построения заключения

Метод жидкостной цитологии представляет собой процесс приготовления клеточных препаратов цервикальных клеток на жидкой основе.

Гинекологические образцы собираются квалифицированным медицинским персоналом с помощью приспособления типа «метёлка» (например, Cervex Brush®) или эндоцервикального комбинированного устройства типа щёточки-шпателя (например, Cytobrush® Plus GT или Pap Perfect® компании MedScand (USA) Inc.

) со съёмными головками. Головку устройства снимают с ручки и помещают во флакон с жидким консервантом SurePath® Preservative Fluid. Флакон закрывают пробкой, прикрепляют этикетку и отправляют в сопровождении соответствующих  документов в лабораторию для обработки.

В лаборатории законсервированный образец перемешивают путём встряхивания, а затем переносят в пробирку с PrepStain® Density Reagent (плотным реагентом).

Стадия обогащения, состоящая из осаждения препарата на центрифуге через плотный реагент, частично удаляет из препарата ненужные для диагностики примеси и избыточные клетки воспаления.

После центрифугирования пробирку с обогащённым клеточным компонентом восстанавливают деионизированной водой, и клеточный материал ресуспендируют с помощью пипеточного дозатора путём последовательного отбора и выпуска жидкости.

Затем материал образца переносится в PrepStain® Settling Chamber (осадочную камеру), помещённую на предметное стекло SurePath® PreCoat. Клетки осаждаются под действием силы тяжести в течение короткого периода инкубации.

Избыточный материал сливают. Микропрепарат SurePath® PreCoat окрашивают, осветляют и накрывают покровным стеклом. Клетки располагаются в круге диаметром 13 мм.

Приложение Д(рекомендуемое)

1 тщательно изучает направление на исследование, сопровождающее этот препарат;

2 сопоставляет ожидаемую (при отсутствии патологии у пациентки указанного возраста, с указанной фазой менструального цикла или продолжительностью менопаузы) цитологическую картину с реально существующей.

Д.2 При отсутствии данных о наличии онкопатологии, предопухолевого процесса или изменений, вызывающих затруднения в их трактовке, сотрудник, производивший исследование, должен сформировать заключение.

Д.2.1 Все информативные препараты, которые не укладываются в понятие «в пределах нормы» (или «возрастная норма»), после тщательного изучения уполномоченным сотрудником (из числа среднего медицинского персонала) и определения наличия изменений эпителия передаются для изучения и формирования заключения цитологу (цитопатологу).

При этом на препараты должны быть нанесены метки, акцентирующие внимание на вызвавших затруднения или подозрение участках препаратов._______________ Метки на препараты наносятся на тыльную сторону предметного стекла (противоположную поверхности, на которой находится сам биоматериал).

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий стандарт: ГОСТ Р 57004 Диагностика в онкологии. Алгоритм диагностики. Шейка матки. Лабораторный этапПримечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год.

Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений.

Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия).

Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения.

Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

Ограничения

  • Гинекологические образцы для приготовления препаратов, получаемых с помощью ручного метода, должны собираться с помощью одобренного устройства типа «метёлка» в соответствии со стандартной процедурой взятия мазка, определённой производителем.
  • Приготовлением и исследованием препаратов TriPath Imaging®, Inc. на жидкой основе могут заниматься только лица, прошедшие обучение в компании TriPath  или иных организациях, уполномоченных компанией TriPath  на проведение подобного обучения.
  • Для обеспечения требуемой эффективности устройства следует использовать только материалы, поставляемые или рекомендуемые компанией TriPath Imaging®, Inc. Использованные материалы должны быть надлежащим образом утилизированы в соответствии с нормативами организации и действующим законодательством.
  • Все материалы предназначены для одноразового использования и не могут быть использованы повторно.
  • Для выполнения цитологического исследования SurePath® на жидкостной основе требуется 8,0±0,5 мл образца, собранного в SurePath® Preservative Fluid Collection Vial (флакон для забора мазка с жидким консервантом).

3 Термины, определения и сокращения

виала: Контейнер с герметичной крышкой, содержащий транспортную жидкость, предназначенный для хранения и транспортирования клеточного материала.

[ГОСТ Р 57004, статья 2.1.2]

3.1.2 вирус папилломы человека; ВПЧ: Группа ДНК-содержащих вирусов, тропных к плоскому эпителию, часть из которых играет ключевую роль в развитии эпителиальных дисплазий и рака шейки матки.

3.1.3 дезоксирибонуклеиновая кислота вируса папилломы человека; ДНК ВПЧ: Дезоксирибонуклеиновая кислота, кодирующая белки вируса папилломы человека, несущая уникальные последовательности нуклеотидов (генетический код), характерные для определенного генотипа вируса папилломы человека.

3.1.4 жидкостная цитология: Способ пробоподготовки материала для цитологического исследования, имеющий определенные преимущества по сравнению с классическим методом и предоставляющий более широкие возможности для диагностики.

мазок: Препарат, приготавливаемый путем нанесения и равномерного распределения (размазывания) биологического материала.

[ГОСТ Р 57004, статья 2.1.3]

3.1.6 цитологический препарат: Клеточный материал, полученный любым способом, нанесенный на предметное стекло для микроскопического исследования.

3.1.7 рак шейки матки: Группа злокачественных новообразований эпителиальной природы, возникающих на влагалищной части шейки матки, в зоне трансформации, цервикальном канале.

3.1.8 диагностический скрининг: Комплекс мер в организации здравоохранения, направленных на раннюю диагностику и выявление заболеваний у клинически бессимптомных лиц в популяции.

3.1.9 скрининг рака шейки матки: Комплекс мер в организации здравоохранения, направленных на выявление патологических изменений на влагалищной части шейки матки, в зоне трансформации, цервикальном канале у здоровой популяции; на формирование групп риска.

3.1.10

транспортная жидкость: Специальная жидкость, использующаяся в жидкостной цитологии для сохранения и/или транспортирования материала. Как правило, представляет собой изотонический раствор с консервантами, фиксирующий и предохраняющий клетки от быстрого распада.

[ГОСТ Р 57004, статья 2.1.5]

3.1.11 лаборант цитологической лаборатории; фельдшер-лаборант; цитотехник; цитотехнолог: Специалист со средним специальным медицинским образованием, имеющий соответствующую квалификацию.

3.1.12 цитопатолог; цитолог: Специалист, работающий в системе здравоохранения, получивший высшее профессиональное образование, имеющий подготовку или переподготовку по специальности «клиническая лабораторная диагностика», прошедший подготовку по клинической цитологии.

Главной функциональной обязанностью является проведение диагностического исследования цитологического материала, результатом которого является цитологическое заключение.

3.1.13

цитощетка: Щеточка для получения эндоцервикальных образцов.

[ГОСТ Р 57004, статья 2.1.6]

3.1.14

cervex-brush: Щеточка для получения биоматериала из Т-зоны (зоны трансформации шейки матки) и влагалищной части шейки матки.

[ГОСТ Р 57004, статья 2.1.7]

3.1.15

ID (identification): Уникальный идентификатор, который присваивается системой каждой отдельной записи или каждому пациенту.

[ГОСТ Р 57004, статья 2.1.8]

3.2 СокращенияВ настоящем стандарте использованы следующие сокращения:ВОЗ — Всемирная организация здравоохранения;ВПЧ-ВР — вирус папилломы человека высокого канцерогенного риска;

ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислотаЖЦ, LBC — жидкостная цитологияИС — информационная система;ИЦХ — иммуноцитохимия;ЛИМС — лабораторная информационная менеджмент-система;

ЛИС — лабораторная информационная система;ЛПУ — лечебно-профилактическое учреждение;МКБ-10 — Международная классификация болезней 10-го пересмотра;ПЦР, PCR — полимеразная цепная реакция;

Предупреждения

  • Жидкий консервант SurePath® Preservative Fluid содержит водный раствор денатурированного этилового спирта и не предназначен для употребления внутрь. Смесь содержит небольшие доли метилового и изопропилового спиртов, которые при приёме внутрь могут быть опасны для здоровья и привести к слепоте.
  • Плотный реагент PrepStain® Density Reagent содержит азид натрия. Азид натрия может реагировать с медными и свинцовыми трубами, образуя высоковзрывчатые азиды металлов. При утилизации смойте большим количеством воды, чтобы предотвратить накопление азида.

Подготовка к анализу

Материал из шейки матки для жидкостной цитологии забирают довольно быстро. Процедура проходит в гинекологическом кабинете, когда пациентка находится на специальном кресле.

Забор происходит безболезненно. За 2 часа пациентке следует перестать мочиться. Кроме этого, анализ не берут во время месячных, воспаления и других выделений из влагалища.

Воздержаться перед тестом от:

  • Секса в течение 2 суток до анализа;
  • Спринцевания;
  • Использования свечей и смазок;
  • Употребления таблеток и противозачаточных средств;
  • Использования тампонов.

Если все требования соблюдены, тогда доктор промакивает шейку матки тампоном из ваты, а далее при помощи щеточки делает забор биоматериала. После помещает его в специальную жидкую среду и отправляет в лабораторию для изучения. Ответ на тест обычно приходит через 10 дней.

Метод получения материала и приготовления препаратов, который будет использоваться в каждом конкретном случае, следует заранее четко согласовать между лабораторией и всеми прикрепленными ЛПУ, что должно быть отражено в соответствующем документе (приказе по ЛПУ и на уровне регионального органа управления здравоохранением).

При подготовке и оформлении материала абсолютно недопустимым является:- использование загрязненных, поврежденных предметных стекол;- использование для маркировки препаратов стеклографов-карандашей старого образца, маркеров на водяной основе;

— отправка для исследования немаркированного материала;- отправка материала без сопровождающих документов;- отсутствие в ЛПУ документально оформленного «прикрепления» к конкретной лаборатории с указанием согласованных взаимных правил и требований, касающихся получения материала, приготовления препаратов, оформления, доставки материала для исследования, сроков доставки, повторных исследований, сроков проведения исследования и предоставления заключений и отчетов, порядка направления пациенток с выявленной патологией для обследования и лечения в другие ЛПУ и т.п.

5.1 Традиционный (классический) метод

5.1.1 Если лаборатория, в которую отправляется материал, использует методы окраски материала по-Паппенгейму, по-Лейшману, по-Романовскому, то материал необходимо нанести на предметное стекло, стараясь равномерно распределить его по препарату для получения максимально равномерного тонкого слоя (монослоя), воздерживаясь при этом от сильного давления на препарат, во избежание раздавливания и/или деформации клеток, затем оставить препарат «открытым» для подсушивания.

Если лаборатория окрашивает материал по-Папаниколау, то материал необходимо нанести на предметное стекло и еще «влажным» немедленно фиксировать. Фиксацию производить смесью Никифорова в течение 10 мин или специальными готовыми растворами-фиксаторами.

5.1.2 Немедленно маркировать (подписать) препарат, используя простой карандаш (если стекло имеет специально обработанный край), тушь или перманентный маркер.

При маркировке указывается ФИО пациентки и/или ее ID (в случае, если сотрудник, проводящий забор материала для исследования, и цитологическая лаборатория используют единую информационную систему).

Возможно использование штрих-кодов и номеров, присваиваемых исследованию информационной системой, если используется штрихкодирование. В любом случае маркировка должна быть четкой, читаемой, надежно закрепленной на стекле, не смываемой водой.

5.1.3 Обязательно подсушивание, во избежание повреждения и/или склеивания при перевозке.

5.2 Метод жидкостной цитологии_______________ Преимущества метода ЖЦ очень существенны. Метод LBC в значительной степени заменил традиционный мазок с шейки матки в Соединенных Штатах Америки и большинстве стран Европы.

Данные, собранные Колледжем американских патологов с сотен американских лабораторий, документально подтверждают уровень обнаружения предраковых изменений эпителия способом ThinPrep.

Он в два раза превышает показатели, представленные по традиционным мазкам.Признана положительная прогностическая ценность и специфичность метода, что позволяет говорить об экономически эффективном обнаружении конкретных и клинически значимых признаков заболевания шейки матки.

5.2.1 Для получения материала используются одноразовые цитощетки различного типа (см. рисунки 1-2). Для получения более информативного материала рекомендуется использовать два вида щеток cervex-brush и цитощетки различных типов.

Цитощетка должна быть со щетинками, расположенными под углом 90°. При заборе материала ее следует поворачивать на 90° не менее двух раз.Комбинированная щеточка используется для одномоментного получения материала из цервикального канала и влагалищной части ШМ. При заборе материала следует сделать пять оборотов по часовой стрелке.

Процесс подготовки клеток для гинекологических исследований

5.2.2 Непосредственно после получения материала каждую щетку необходимо немедленно перенести в транспортную жидкость в емкость-виалу, отделив саму щетку от рукоятки (если производителем щетки не предусмотрено иное), и герметично закрыть виалу с целью исключения возможности проливания и испарения содержимого.

5.2.3 Маркировка виал производится в процедурном кабинете непосредственно после забора биоматериала. Для маркировки виал необходимо использовать простой карандаш, ручку (при наличии у виалы бумажной этикетки) или перманентный маркер.

При маркировке указывают ФИО пациентки и/или ее ID (в том случае, если сотрудник, получающий материал для исследования, и лаборатория используют единую информационную систему).

Возможно применение штрих-кодов и номеров, присваиваемых исследованию информационной системой, если используется штрихкодирование. В любом случае маркировка должна быть четкой, читаемой, надежно закрепленной на виале, не смываемой водой.

Приложение Е(рекомендуемое)

Е.1 Метод жидкостной цитологииДля получения материала используются одноразовые цитощетки. Порядок и описание процесса получения материала описан в таблице Е.1.Таблица Е.

N этапа

Описание процесса

Графическое отображение процесса

1

Вставить центральную часть щеточки в канал шейки матки достаточно глубоко, чтобы обеспечить более коротким щетинкам полный контакт со слизистой эндоцервикса.

Аккуратно нажать и повернуть щеточку в направлении по часовой стрелке пять раз.

<img alt="ГОСТ Р 57005-2016 Диагностика в онкологии. Скрининг. Рак шейки матки" class="doc-image" src="//docs.cntd.ru/picture/get?id=P018B00050000

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Медицинский взгляд на еду
Adblock
detector