Автоматический процессор для создания стандартизированного монослойного мазка методом жидкостной цитологии «СellSlide» Audit Diagnostics (Ирландия)

Когда и кому нужны такие скрининги

Бытует мнение, что регулярное онкогинекологическое обследование необходимо проходить только женщинам, приближающимся к преклимактерическому периоду. Но это не так.

Согласно современным клиническим рекомендациями, скрининг рака шейки матки с проведением цитологического исследования рекомендован всем женщинам с 21 года.

Вообще его рекомендуют начинать спустя 3 года после первого полового контакта. Так что раннее вступление в интимную жизнь – основание для раннего начала профилактических гинекологических осмотров.

В первые 2 года скрининг на рак шейки матки проводят ежегодно. В последующем, при отрицательных результатах повторных цитологических исследований, профилактические осмотры становятся более редкими и проводятся 1 раз в 2-3 года.

Поводом для учащения онкогинекологических обследований является появление у женщины фоновых и предраковых заболеваний шейки матки. При этом пациентку относят к группе высокого риска по развитию рака, а цитологическое исследование гинекологических мазков проводят ей ежегодно.

Жидкостная цитология при беременности производится по строгим показаниям. К ним относят выявление у пациентки изменений на шейке матки, подозрительных на предрак или злокачественную трансформацию.

Следует помнить, что такой анализ повышает вероятность угрозы прерывания беременности и может потребовать мер, направленных на нормализацию маточного тонуса.

Приложение Г (рекомендуемое). Перечень и краткая характеристика необходимого оборудования и расходных материалов, применяемых при использовании метода жидкостной цитологии

Что такое жидкостная цитология? Это современный инновационный вариант цитологического исследования, с помощью которого диагностируются новообразования шейки матки.

Именно этот метод позволяет выявить злокачественную опухоль или предраковое состояние на самых ранних стадиях. Благодаря этому шансы на полнейшее выздоровление увеличиваются в несколько раз.

Суть метода жидкостной цитологии заключается в том, биологический материал помещают не на стекло, а в жидкую среду.

Специальной щеточкой производят соскоб из трех зон шейки: поверхность влагалищной части, шеечный канал, переходная зона. Биоматериал погружают в жидкость.

В лаборатории материал извлекают из пробирки с жидкой средой, клетки эпителия отмывают от различных примесей, слизи и других выделений, обогащают и наносят на предметные стекла, исследуют под микроскопом.

Затем проводят классический ПАП-тест, а при необходимости жидкостная цитология позволяет выполнить и иммуногистохимические тесты, например, поиск онкомаркера шейки матки р16.

Такой способ значительно повышает точность диагноза. Клетки шеечного отдела, пораженные дисплазией 2 и 3 степени или раком, активно продуцируют белок р16, при этом анализ ПЦР на ВПЧ может быть и отрицательным, что затрудняет диагностику. Жидкостная цитология расширяет рамки современной диагностики.

Согласно статистическим данным, классический ПАП-тест при наличии предрака дает ложноотрицательный результат в 15 – 50% случаев. Это обусловлено методикой выполнения теста, что ведет к маскировке предраковой атипии под воспалительную.

Такой способ позволяет получить максимально «чистую» культуру клеток, благодаря чему в дальнейшем ставится наиболее точный и развернутый диагноз. С помощью жидкостной цитологии можно не только уточнить наличие или отсутствие клеток злокачественной природы, но и определить стадию заболевания.

Основными показаниями для проведения жидкостной цитологии являются:

  • наличие эрозии шейки матки.
  • очаги лейкоплакии, эритроплакии;
  • кондиломы шейки матки;
  • кисты;
  • контроль после лечения;
  • профилактическое обследование;
  • в рамках обследования на ИППП;
  • бесплодие;
  • длительный прием противозачаточных или гормональных средств;
  • наступление менопаузы.

Жидкостную цитологию рекомендуется проводить приблизительно один раз в год, так же, как и посещать гинеколога для профилактического осмотра.

Жидкостная цитология является одним из ведущих методов диагностики раковых и предраковых состояний в гинекологии. По сравнению с другими методами исследования цитологических и гистологических образцов шейки матки, жидкостная цитология имеет ряд преимуществ:

  • более высокое качество и сохранение целостности отобранных культур клеток. Это обеспечивается специализированным стабилизирующим раствором, в который помещают биоматериал перед микроскопированием;
  • простота и быстрота подготовки цитологического мазка. Специальная аппаратура позволяет проводить стабилизацию и промывание сразу нескольких образцов;
  • метод позволяет окрашивать клетки в разных техниках, что дает возможность обнаружить различные вирусы, патогенные бактерии и инфекции, онкомаркеры;
  • подготовительные этапы жидкостной цитологии, а именно промывка и стабилизация препаратов, в несколько раз повышают информативность и точность мазков. Это достигается путем удаления слизи, крови и других выделений, а также отмывки образца от разрушенных клеток эпителия шейки матки;
  • образцы могут долго храниться как в лаборатории, так и при транспортировке в другое медицинское учреждение;
  • с помощью жидкостной цитологии можно получать монослойные культуры клеток. Это позволяет специалисту более детально и объективно оценить клеточное окружение, особенности структуры и строения клеток, а также предположить наличие злокачественных опухолей.

Жидкостная цитология в настоящее время считается наиболее информативным, безопасным, быстрым и точным видом диагностики рака шейки матки. С помощью этого метода можно максимально точно определить структуру клеток, изменения в них, а также обнаружить воспалительные или инфекционные процессы, происходящие в половых органах женщины.

Приложение Г(рекомендуемое)

Г.1 Техническое оснащение лаборатории для проведения метода ЖЦ:- центрифуга лабораторная с качающимся ротором, приспособленным для центрифугирования пробирок диаметром 17 мм, объемом 15 мл, способная обеспечить центрифугирование 600 g;

— «вортекс» для пробирок с плавной регулировкой скорости встряхивания от 100 до 3000 rpm;- прибор для автоматического приготовления клеточной суспензии, выполняющий начальный процесс обогащения клеточной суспензии (состоящий в очистке суспензии от эритроцитов, детрита и элементов воспаления): перемешивание образца и его извлечение из пробирки с консервантом, затем нанесение образца на плотный реагент в пробирку для центрифугирования;

— аппарат для автоматической окраски препаратов — прибор для окрашивания образцов или эквивалент, который предназначается для обработки микропрепаратов, автоматического переноса клеточных образцов из пробирок для центрифугирования в осадочную камеру, помещаемую на предметное стекло для микроскопа, автоматически окрашивает и промывает каждый микропрепарат;

— рабочая станция для управления прибором или эквивалент: системный блок с предустановленным программным обеспечением, монитор, клавиатура, мышь;- аспиратор — система создания вакуума для удаления продуктов окрашивания: емкость, компрессор, комплект трубок не менее одного комплекта;- считыватель штрих-кода.

Г.2 Расходные материалы:- одноразовые пробирки из пластика диаметром 17 мм, вместимостью до 15 мл, с закручивающейся крышкой, выдерживающие центрифугирование при скорости 600 g;

— одноразовые стерильные виалы с транспортной средой;- одноразовые стерильные цитологические щетки для забора материала с влагалищной части шейки матки;

— одноразовые стерильные цитологические щетки для забора материала из цервикального канала;- предметные стекла для микроскопии с адгезивным покрытием (например, D-полилизиновым) или без оного — в зависимости от конкретной методики;

— набор одноразовых пастеровских пипеток для работы с жидкостью и клеточным осадком;- при необходимости — пленка или покровные стекла для покрытия препаратов;

— консервирующая (транспортная) жидкость;- красители, буферы, забуференная или дистиллированная вода, фиксаторы и спецрастворы в зависимости от способа окраски;

— одноразовые наконечники для переноса и дозирования материала;- средство для промывания аппарата для автоматической окраски препаратов;- контейнер для сбора и утилизации отходов класса B.

Приложение Б (рекомендуемое). Журнал регистрации материала, поступающего в цитологическую лабораторию, и проведенных исследований

Подготовка к жидкостной цитологии шейки матки начинается за 2-3 дня до теста и включает:

  • половой покой;
  • отказ от спринцеваний;
  • прекращение использования любых средств для вагинального введения (свечей, таблеток, спреев).

Когда лучше делать скрининг?

Цитологическое исследование не проводят во время менструации, за 5 дней до нее и 5 дней после. Предпочтение отдается первой половине менструального цикла, хотя эта рекомендация не является строгой.

Если пациентке была проведена кольпоскопия, цитологическое исследование допустимо не ранее чем через 24 часа после нее. А в случае биопсии шейки матки – лишь по истечении 3 недель.

Для получения наиболее точных и информативных результатов исследования, пациентке необходимо пройти подготовку к проведению жидкостной цитологии эпителия шейки матки. Перед процедурой взятия мазка нужно:

  • за 2-3 суток воздержаться от половых актов;
  • исключить использование вагинальных свечей, спреев, тампонов и методов контрацепции, подразумевающих введение во влагалище;
  • сдавать анализ спустя 4 недели от окончания лечения антибиотиками, противовоспалительными и гормональными препаратами;
  • не мочиться в течение двух часов перед процедурой.

Цитологию шейки матки, а именно жидкостную цитологию проводят в определенный период менструального цикла. Обследование не осуществляют во время кровотечения и за 5-7 дней до начала менструации.

Это связано с определенными изменениями в структуре клеток шейки матки, раскрытием отверстия цервикального канала и с высоким риском занесения инфекции.

4.1 Метод получения материала и приготовления препаратов, который будет использован в каждом конкретном случае, должен быть заранее четко согласован между лабораторией и отделением ЛПУ, что должно быть отражено в соответствующем документе.

4.2 При использовании метода классической цитологии материал после получения помещают на предметное стекло путем нанесения и равномерного распределения (размазывания) биологического материала вдоль стекла, избегая чрезмерного механического воздействия (чтобы не раздавить клетки).

Одновременно с этим необходимо стремиться к получению тонкого монослоя.Материал с шейки матки и материал из цервикального канала помещают на разные стекла, маркируемые соответственно нанесенному материалу.

Препараты подсушивают в течение нескольких минут на открытом воздухе (при использовании методов окраски по Паппенгейму, по Лейшману и др.) и могут транспортировать в лабораторию.

4.3 При использовании метода ЖЦ полученный материал необходимо немедленно перенести в транспортную жидкость в емкость — виалу, отделив саму щетку от рукоятки (если производителем щетки не предусмотрено иное), и герметично закрыть виалу с целью исключения возможности проливания и испарения содержимого.

4.3.1 Следует сразу же маркировать (подписать) виалу, используя простой карандаш, ручку (при наличии этикетки) или перманентный маркер.

4.4 При маркировке указывают фамилию, имя, отчество пациентки и/или еe ID (в том случае, если сотрудник, получающий материал для исследования у пациентки, и лаборатория используют единую информационную систему).

Возможно применение штрих-кодов и номеров, присваиваемых исследованию информационной системой, если используется штрихкодирование. В любом случае маркировка должна быть четкой, читаемой, надежно закрепленной на виале, не смываемой водой.

4.5 Абсолютно недопустимым является:- использование для маркировки препаратов стеклографов, карандашей старого образца, водных маркеров;- отправка для исследования немаркированного материала;

— отправка материала без сопровождающих документов;- отсутствие в ЛПУ документально оформленного «прикрепления» к конкретной лаборатории, с указанием согласованных взаимных правил и требований, касающихся получения материала, приготовления препаратов, оформления, доставки материала для исследования, сроков доставки, повторных исследований, сроков проведения исследования и предоставления заключений и отчетов, порядка направления пациенток с выявленной патологией для обследования и лечения в другие ЛПУ и т.п.

Приложение А(рекомендуемое)

Министерство здравоохранения

Российской Федерации

Медицинская документация

Форма N 203/у-02

Утверждена приказом Минздрава России
от 24.04.2003 N 174

Наименование учреждения

НАПРАВЛЕНИЕ
на цитологическое диагностическое исследование и результат исследования

ПЕРВИЧНО
ПОВТОРНО
(подчеркнуть)

1. Отделение

История болезни N

2. Лечащий врач (ФИО, тел.)

3. ФИО больного (полностью)

4. Дата рождения

Пол: м ( ), ж ( )

5. Страховая компания

N страхового полиса

Серия

6. Диагноз (при направлении на цитологическое исследование)

Код по МКБ-10

7. Краткий анамнез и важнейшие клинические симптомы:

8. Данные инструментального обследования (рентгенологического, УЗИ, КТ, эндоскопического и др.)

9. Проведенное лечение (оперативное, лучевое, химиотерапия; доза, дата начала и окончания лечения)

10. Локализация процесса и способ получения материала

11. Объем и макроскопическое описание биологического материала, маркировка препаратов

12. Дата взятия биологического материала

ФИО врача, направившего материал

Подпись врача

13. Объем и макроскопическое описание доставленного биологического материала (заполняют в лаборатории):

(Оборотная сторона)

Наименование цитологической лаборатории, телефон

Результат цитологического исследования N

Дата поступления материала

Дата проведения исследования

ФИО врача, проводившего исследование

Подпись

Приложение Б(рекомендуемое)

Б.1 Обязательные поля:- дата поступления материала;- номер исследования;Примечание — Указывают в диапазоне в зависимости от количества препаратов. Далее ставится знак «/» (например, для пяти препаратов, поступивших 1 января 2002 г.

первыми, номер будет 1-5/02, следующие два препарата — (6-7/02).- первично/повторно;- отделение (учреждение), приславшее материал;- N истории болезни или ID;

— лечащий врач (ФИО, тел.);- ФИО больного (полностью);- пол;- дата рождения;- диагноз (при направлении на цитологическое исследование), код по МКБ-10;

— важнейшие клинические данные;- метод получения материала;- откуда получен материал;- характер материала;- объем и макроскопическое описание биологического материала, маркировка препаратов;

— дата взятия биологического материала;- ФИО врача, направившего материал;- дата проведения исследования;- результат цитологического исследования N;- ФИО врача, проводившего исследование.

Б.2 Журнал должен быть прошнурован, пронумерован и скреплен печатью.

Как проводится жидкостная цитология

В настоящее время в клинической практике используются несколько технологических вариантов жидкостной цитологии. Наиболее известной и востребованной из них является Becton Dickinson (BD) Sure Path™, которая была одобрена FDA в США в 1999 году, с 2004 года официально одобрена NICE в Великобритании.

Основными этапами этого исследования являются:

  1. Забор материала. Для этого используется специально разработанная комбинированная цитощетка особой конструкции. Ее аккуратно вводят в цервикальный канал, после чего совершают вращательные движения (2 против движения часовой стрелки и 3 по ее ходу). Это обеспечивает максимально возможное и при этом малотравматичное получение поверхностно расположенных клеток слизистой оболочки шейки матки – с ее влагалищной части, из цервикального канала и прилегающих участков влагалища. Такая манипуляция не требует анестезии, ведь испытываемые женщиной ощущения не превышают болевой порог.
  2. Помещение цитощетки с полученным материалом в специальную пробирку (флакон) с особой жидкостью, что и дало название методике. Такая среда не только обладает консервирующими и стабилизирующими свойствами, но и способствует образованию суспензии с равномерным распределением клеток и других элементов по всему объему. Пробирки транспортируются в лабораторию, имеющую лицензию на проведение жидкостной цитологии и соответственно оснащенную.
  3. Автоматизированная подготовка цитопрепарата. Включает вакуумную фильтрацию порции суспензии из пробирки, центрифугирование, нанесение полученного клеточного осадка равномерным слоем на стекло-слайд, окраску по методу Папаниколау с использованием влажной фиксации.
  4. Микроскопия цитопрепарата. ПАП-тест на основе жидкостной цитологии осуществляется по тем же принципам, что и в случае традиционной методики. Но при этом учитываются особенности окраски, положения и размеров клеток после влажной фиксации цитопрепарата. Именно поэтому исследование может проводиться только прошедшим специальное обучение сертифицированным врачом-лаборантом.

Расшифровка результатов анализа производится только гинекологом или онкологом. Ответ из лаборатории может быть получен через 5-10 дней после забора материала.

Но нередко этот срок удлиняется до 2-3 недель. Скорость получения ответа зависит от времени транспортировки, загруженности лаборатории и способа информирования поликлинического звена о данных проведенных исследований.

Автоматический процессор для создания стандартизированного монослойного мазка методом жидкостной цитологии «СellSlide» Audit Diagnostics (Ирландия)

А что после исследования?

Период восстановления после жидкостной цитологии принципиально не отличается от такового при взятии обычного мазка на онкоцитологию или биопсии шейки матки.

В течение 1,5 недель рекомендуется выдерживать половой покой, отказаться от использования вагинальных тампонов и спринцеваний. В первые дни после теста допустимы необильные кровянистые выделения из влагалища, поэтому женщине желательно пользоваться гигиеническими прокладками.

Повышение температуры тела, продолжительные или обильные кровянистые выделения, боли внизу живота – тревожный признак. Появление таких симптомов требует скорейшего обращения к врачу.

К ключевым различиям этих скрининговых методик относят:

  • При обычном цитологическом исследовании образцы тканей забирают прицельно, участки для исследования выбирается врачом на основании визуальных изменений слизистой оболочки. В случае жидкостной методики материал у любой женщины получают со всей окружности шейки матки. Это существенно снижает вероятность, что какой-либо измененный участок будет пропущен.
  • При проведении обычной цитологии биоматериал перед отправкой высушивают на стекле в условиях комнатной температуры. А при жидкостной цитологии его помещают в особую пробирку (флакон) со специальной стабилизирующей средой, что продлевает допустимый срок транспортировки и хранения полученного образца. Помещенный в пробирку биоматериал пригоден для исследования в течение нескольких месяцев и не требует создания особых условий.
  • При традиционной методике не проводится фильтрация. Поэтому при наличии в мазке воспалительных элементов, большого количества слизи и других примесей результат цитологического исследования оказывается недостаточно достоверным и обычно требует повторного проведения ПАП-теста после лечения. Этого недостатка лишена жидкостная методика.
  • При традиционной методике далеко не весь объем полученной ткани попадает на стекло и подвергается последующему исследованию. До 35-40% клеток остается на инструменте и перчатках врача. Это создает вероятность, что имеющиеся озлокачествляющиеся ткани останутся не диагностированными. При жидкостной методике такой потери биоматериала не происходит. Это обеспечивается помещением цитощетки в стабилизирующую и суспензирующую среду, последующим автоматизированным центрифугированием образца и формированием специального цитопрепарата со стандартизированным ровным слоем клеток на стекле-слайде.
  • При традиционном взятии мазка на онкоцитологию клетки на предметно стекле располагаются обычно в несколько слоев, накладываясь друг на друга и тем самым ухудшая визуализацию. Жидкостная цитология bd shurepath лишена этого недостатка, получаемый цитопрепарат является монослойным.
  • Возможность проведения повторного анализа того же биоматериала или других исследований при использовании жидкостной цитологии. Ведь суспензия в пробирке не теряет своих свойств в течение нескольких месяцев, а ее объема достаточно для получения нескольких цитопрепаратов. При традиционной методике исследуемые ткани ничем не защищены, и имеется высокий риск их повреждения при хранении.

В целом жидкостная цитология с использованием автоматического скрининга является существенно более информативной методикой по сравнению с традиционным забором мазков с шейки матки на онкоцитологию.

И основное ее достоинство – малый процент ложноотрицательных результатов онкогинекологического скрининга, что обеспечивается прогрессивными технологическими особенностями теста при строгом соблюдении правил забора биоматериала.

Приложение В(рекомендуемое)

В.1 Общие требования

В.1.1 На все аппаратные средства, принадлежности, реагенты и расходные материалы комплекса для приготовления и окраски цитологических препаратов должны быть регистрационные удостоверения Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития.

В.1.2 К оборудованию в обязательном порядке следует прилагать инструкцию на русском языке и подробное руководство пользователя.

В.1.3 Все компоненты оборудования (системы) должны быть приобретены у одного производителя либо производитель/поставщик должен предоставить официальные сведения о совместимости с оборудованием других фирм.

В.2 Приготовление и окрашивание препаратов при проведении цитологических исследований

В.2.1 Технология взятия и доставки биологического материала должна предоставлять возможность переноса на предметное стекло без потерь всего биологического материала, взятого у пациентки.

В.2.2 Срок годности консервирующей жидкости для гинекологического материала при хранении при комнатной температуре (от 15 до 30 °C) должен составлять не менее 32 мес со дня изготовления.

В.2.3 Срок хранения флакона с клеточным материалом при комнатной температуре должен составлять не менее 2 недель.

В.2.4 Оборудование должно предоставлять возможность получить готовый препарат как без содержания эритроцитов и слизи, так и при сохранении исходного их количества в препарате.

В.2.5 Транспортная жидкость, используемая для сохранения материала при транспортировании, не должна препятствовать проведению других видов исследования (ИЦХ, ПЦР и пр.).

В.2.6 При наличии в составе консерванта (транспортной жидкости) веществ, влияющих на выбор тактики при проведении дополнительных исследований, производитель или поставщик должны в письменном виде предоставить информацию, касающуюся этого вопроса, самостоятельно или по запросу пользователя.

В.2.7 Технология приготовления и окраски клеточного материала должна быть управляемой и допускать изменения в случае необходимости для подготовки препаратов из различного материала, в том числе негинекологического, жидкостей и пр.

В.2.8 Оборудование должно обеспечивать возможность:- управления объемом клеточной суспензии;- управления объемом переносимого на предметное стекло клеточного материала;

— одновременного приготовления серии идентичных препаратов из одного материала в количестве не менее чем 12 шт. (от 1 до 12);- вносить изменения в ход работы и протоколы;

— обработки материала, не исключающей дальнейшего использования препарата как для традиционного цитологического исследования, так и для автоматизированного;

— использования оставшегося после приготовления препаратов клеточного материала в других видах исследований;- приготовления нативных (неокрашенных) монослойных препаратов, не менее 90 в 1 ч;- приготовления окрашенных монослойных препаратов, не менее 40 в 1 ч.

7 Лабораторный этап

Жидкостная цитология шейки матки представляет собой довольно простой способ диагностики опухолевых образований. Принцип взятия мазка ничем не отличается от обычного цитологического метода, однако, дальнейшая подготовка культуры имеет свои различия.

Основные этапы проведения жидкостной цитологии.

  1. Пациентка располагается на гинекологическом кресле.
  2. Врач вводит в полость влагалища зеркала для того, чтобы шейка матки была полностью видна невооруженным взглядом.
  3. Проводится взятие соскоба с поверхности шейки, переходной зоны и цервикального канала.
  4. Биоматериал помещается в контейнер со специальным раствором. Именно поэтому метод получил название «жидкостная цитология».
  5. Далее емкость с биоматериалом помещается в аппарат, обеспечивающий очищение клеток от примесей, слизи, выделений, а также нанесение однослойной культуры клеток на стекло.
  6. Проводится детальное исследование образца под микроскопом.
  7. Лаборант делает свое заключение и передает результаты лечащему врачу.

Благодаря такой особой технике подготовки биоматериала к микроскопическому исследованию метод жидкостной цитологии обеспечивает максимально точную постановку диагноза.

7.1 Общие положенияНа все оборудование, принадлежности, реагенты и расходные материалы для пробоподготовки цитологических препаратов должны быть представлены регистрационные удостоверения Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития.

7.1.1 Все компоненты оборудования/систем должны быть приобретены у одного производителя, либо производитель/поставщик должен предоставить официальные сведения о совместимости с оборудованием других фирм.

7.1.2 К оборудованию в обязательном порядке следует прилагать инструкцию на русском языке и подробное руководство пользователя.

7.1.3 Все используемые реактивы для обработки и окраски биологического материала должны соответствовать срокам годности.

7.1.4 Сотрудник лаборатории (из числа среднего медицинского персонала) допускается к осуществлению пробоподготовки по методу ЖЦ после соответствующего распоряжения заведующего лабораторией.

7.1.5 Сотрудник, допускаемый к работе по методу ЖЦ, должен быть предварительно подготовлен и обучен работе с приборами у производителя (или его уполномоченного представителя).

7.1.6 Сотрудник, допускаемый руководителем лаборатории к работе, в том числе по методу ЖЦ, должен быть обучен методам контроля информативности материала путем микроскопии окрашенных препаратов.

7.1.7 Следует обратить внимание на перечень характеристик рекомендованного к использованию оборудования для ЖЦ (см. приложения В и Г).

7.1.8 Для пробоподготовки материала с ШМ, производящегося с целью выявления и ранней диагностики рака методом ЖЦ, использование цитоцентрифуг нецелесообразно.

7.1.9 Каждая лаборатория составляет внутренний документ — «Инструкцию по подготовке материала для исследования методом ЖЦ».

7.1.10 В данном документе подробно, по пунктам, расписывают весь процесс приготовления препаратов на основе ЖЦ для данной лаборатории с указанием конкретного оборудования, в соответствии с рекомендациями производителя оборудования, используемого в лаборатории.

7.1.11 В инструкции указывают, в том числе фирменные названия приборов, материалов, реагентов (названия растворов, включая фирменные, позволяющие их однозначно идентифицировать), номеров и/или названий программ, запускаемых на автоматических приборах, описание конкретных методик окраски, применяемых в данной лаборатории, названия форм и бланков, заполняемых в процессе выполнения методики.

Инструкция должна содержать следующие пункты:- назначение процедуры;- описание процедур;- сбор материала;- приготовление окрашенных цитологических препаратов методом ЖЦ.

image003.jpg

Приложением к данной инструкции должны служить:- перечень сотрудников, допущенных к работе по этому направлению (с указанием должностей сотрудников, принимающих участие в пробоподготовке и диагностике);

— ответственные за осуществление этих работ;- оборудование;- материалы;- реагенты;- процедуры;- литература (при необходимости);- перечень заполняемых форм.

7.1.12 Документ подписывает заведующий лабораторией; копии хранятся на рабочих местах непосредственных исполнителей методик.

7.2 Пробоподготовка

7.2.1 Материал для проведения исследования должен быть доставлен в лабораторию на маркированных предметных стеклах, а в случае использования метода ЖЦ — в маркированной емкости (виале) с транспортной жидкостью, количество которой варьирует в зависимости от объема и производителя виалы.

7.2.2 Пробоподготовку в рамках ЖЦ из доставленного в лабораторию материала в виалах необходимо произвести не позднее срока, указанного производителем.

Например, не позднее четырех недель после получения материала, находящегося при комнатной температуре от 15 до 30°С; при температуре холодильной камеры от 2 до 10°С можно обрабатывать материал в течение полугода.

7.2.3 Этапы пробоподготовки (если производителем оборудования не предусмотрено иное):_______________ Аналогично ГОСТ Р 57005 (см. подраздел 7.3).

7.2.3.1 содержимое виал перемешать;

7.2.3.2 консервирующую жидкость налить с помощью пипетки в пробирки для центрифугирования (~ 1/3 части пробирки);

7.2.3.3 для приготовления клеточной суспензии материал (~1/3 часть пробирки) перенести из виалы в пробирку в консервирующую жидкость (использовать аппарат для приготовления клеточной суспензии типа BD PrepMate™);

7.2.3.4 пробирки поместить в центрифугу и центрифугировать в щадящем режиме (при 200 rcf, 2 мин);_______________ Relative centrifugal force — относительная центробежная сила, выражается в единицах g (гравитационная постоянная).

7.2.3.5 с помощью аспиратора убрать надосадочную жидкость и центрифугировать (при 800 rcf, 10 мин);

7.2.3.6 слить надосадочную жидкость полностью, резким движением перевернув штатив с пробирками на 180°;_______________ В дальнейшем слитую жидкость утилизировать в соответствии с правилами обращения с отходами категории В.

7.2.3.7 с помощью «вортекс» перемешать образовавшийся клеточный осадок (~15 с);

7.2.3.8 перенос полученного клеточного осадка на предметные стекла проводить в соответствии с процедурой, установленной производителем оборудования;

7.2.3.9 аппарат для приготовления и окрашивания препаратов использовать в соответствии с руководством производителя оборудования;

7.2.3.10 приготовить препараты;

7.2.3.11 предметные стекла с нанесенным биоматериалом после окрашивания (если использовалось окрашивание по Папаниколау) промыть спиртом [опустив в емкость со спиртом или сливая спирт из пипетки (выше монослоя)]. Можно использовать специальный спрей для фиксации;

7.2.3.12 подсушить препарат;

7.2.3.13 подготовить покровные стекла необходимого размера;

7.2.3.14 на препарат в центр монослоя нанести монтирующую среду;_______________ Главное требование к монтирующей среде — соответствие ее коэффициента преломления света к аналогичному показателю стекла.

7.2.3.15 заключить препарат под покровное стекло/пленку;

7.2.3.16 монтировать вручную покровное стекло следующим образом:- приложить покровное стекло ребром под углом к препарату и опустить, избегая образования воздушных пузырей,- при необходимости слегка нажать на покровное стекло, удалить излишки монтирующей среды (с помощью ваты/марли со спиртом/ксилолом),- дать препарату подсушиться (время зависит от монтирующей среды);

7.2.3.17 использовать автоматизированные приборы для заключения препаратов под покровное стекло или пленку в соответствии с руководством производителя оборудования;

7.2.3.18 препараты, приготовленные традиционным способом, окрашивают теми же методами, что и препараты, приготовленные в рамках метода ЖЦ.

7.3 Хранение биоматериала

7.3.1 Нативный жидкостной биоматериал без добавления консервантов или транспортной жидкости, доставленный в лабораторию или оставшийся после взятия для исследования, можно хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 10°С не более 4 ч.

7.3.2 Биоматериал в транспортной среде в комнатных условиях при температуре от 15 до 30°С можно хранить не более 4 недель, если иное не предусмотрено производителем транспортной среды или консерванта.

7.3.3 Биоматериал в транспортной среде можно хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 10°С не более 6 мес, если иное не предусмотрено производителем транспортной среды или консерванта.

7.3.4 Окрашенные препараты, по которым выявлена онкопатология или предопухолевые изменения, необходимо хранить в комнатных условиях (при температуре от 15 до 30°С) в течение срока, установленного данным лечебным учреждением, но не менее 10 лет.

7.3.5 Окрашенные неинформативные препараты при температуре от 15 до 30°С необходимо хранить 2 недели (для контроля качества).

7.3.6 Транспортную среду при температуре от 15 до 30°С хранить не более 36 мес (если производителем реагентов не предусмотрено иное).

7.3.7 Нативный биоматериал, поступивший в лабораторию на предметных стеклах, можно хранить в сухом помещении без ограничений до момента использования.

7.3.8 Утилизацию отходов осуществляют в соответствии с требованиями действующих нормативных документов [5], а также инструкциями к приборам, реагентам и расходным материалам, использующимся для приготовления препаратов методом ЖЦ в данной лаборатории.

7.4 Диагностический этап

7.4.1 Подготовленные к просмотру препараты в сопровождении направления в установленном порядке отправляют на диагностику.

7.4.1.1 К диагностике материала, приготовленного любым методом, допускается только персонал, прошедший обучение и допущенный на этом основании к работе руководителем лаборатории с оформлением соответствующего распоряжения (приказа) по лаборатории.

7.4.2 Для адекватной оценки препарата необходимо системно произвести просмотр всего клеточного материала (см. рисунок 5), а затем дать оценку качества препарата и его информативности.

Рисунок 5 — Наиболее эффективная схема направления просмотра препарата

7.4.3.1 о качестве препарата, его информативности;

7.4.3.2 о том, какое количество препаратов оценивают (описывают);

Приложение А (рекомендуемое). Направление на цитологическое диагностическое исследование и результат исследования

Расшифровка результатов проведения жидкостной цитологии осуществляется только высококвалифицированным гинекологом или онкологом. Обычно спустя несколько дней, данные из лаборатории попадают к врачу.

Итоги исследования могут иметь как отрицательный, так и положительный результат. В первом случае это говорит о том, что в эпителии шейки матки не происходит никаких злокачественных процессов.

Если же в результате жидкостной цитологии были получены положительные результаты, это говорит о наличии атипичных клеток. Лаборант устанавливает степень заболевания, особенности и видоизменения клеток.

Стадия болезни устанавливается в соответствии с международными классификациями по ВОЗ (CIN1, CIN2, CIN3) и по Бетесда (ASCUS, LSIL, HSIL).

Выделяют несколько типов полученных результатов:

  • патологические изменения клеток не обнаружены, мазок в норме (NILM);
  • имеется несколько аномальных клеток. Это может свидетельствовать о протекающем в организме женщины воспалительном процессе – воспалительный мазок;
  • незначительные атипические изменения в одном слое эпителия (CIN1 или ASCUS);
  • атипичные клетки поражают две трети эпителиального слоя (CIN2 или LSIL);
  • эпителиальные клетки поражены во всех его слоях, атипичные клетки расположены вплоть до базальной мембраны, множественные митозы, изменение ядерно-цитоплазматического отношения, многоядерные клетки (CIN3 или HSIL). Следующей стадией является инвазивный рак.

В качестве дополнительных исследований может быть назначена кольпоскопия, повторное проведение жидкостной цитологии. Обязательным считается выполнение ПЦР анализа мазка на наличие вируса папилломы человека, а также бак посев выделений из влагалища.

При расшифровке результатов врач должен принимать во внимание объем материала, взятого для жидкостной цитологии, период менструального цикла, в котором находится женщина, а также прием различных медикаментов, которые могли исказить результаты исследования.

Приложение А (рекомендуемое). Направление на цитологическое диагностическое исследование и результат исследования

Жидкостной цитологический скрининг направлен на выявление разнообразных клеточных атипий, что показывает наличие у женщины предракового состояния или рака шейки матки.

Однослойность и однородность цитопрепарата обеспечивают высокую степень визуализации, позволяя врачу-лаборанту достоверно определять характер изменений.

Наличие суспензии и ее достаточный объем позволяют по показаниям дополнительно проводить другие исследования:

  • анализ на онкомаркеры;
  • любые ПЦР-исследования;
  • ВПЧ-тестирование;
  • иммуноцитохимические исследования с определением маркеров пролиферации.

Но жидкостная цитология не позволяет диагностировать воспалительные состояния, ведь обязательный этап фильтрации удаляет из суспензии детрит, лейкоциты и другие примеси.

Поэтому при подозрении на цервицит и кольпит целесообразно параллельное взятие традиционного мазка на онкоцитологию. Это является существенным недостатком методики.

Тем не менее, жидкостная цитология по Папаниколау рекомендуется ВОЗ, FDA и мировыми противораковыми сообществами в качестве «золотого стандарта» для ранней диагностики рака шейки матки.

Но в настоящее время в РФ при проведении скрининга чаще всего используется все же традиционный мазок на онкоцитологию. Это связано в основном с недостаточным техническим оснащением поликлинического звена и отсутствием должной квалификации у врачей.

Введение

В настоящем стандарте реализованы основные нормативные положения документов [1]-[4].Настоящий стандарт разработан для внедрения в практику здравоохранения унифицированных алгоритмов проведения пробоподготовки, в том числе:- для метода жидкостной цитологии с целью оптимизации и систематизации деятельности лечебно-профилактических учреждений и специалистов в области раннего выявления и диагностики рака;

— эффективной и своевременной (ранней) диагностики и лечения опухолей, масштабной борьбы против рака на региональном, национальном и глобальном уровнях в целях увеличения выживаемости, снижения смертности от онкологических заболеваний;

— обеспечения доступности лечения для пациентов, страдающих онкологическими заболеваниями.Настоящий стандарт может быть использован специалистами как методическое руководство при осуществлении профессиональной деятельности, а также учреждениями здравоохранения и органами государственной власти при создании нормативных правовых актов.

1 Область применения

Настоящий стандарт разработан как руководство по организации и проведению диагностических мероприятий, в том числе с использованием метода жидкостной цитологии, для руководителей лечебно-профилактических учреждений, гинекологических отделений, женских консультаций, лабораторий, врачей-гинекологов, сотрудников женских консультаций, смотровых кабинетов, цитологических лабораторий.

Настоящий стандарт разработан в соответствии с настоятельными рекомендациями ВОЗ о мероприятиях по борьбе с онкологическими заболеваниями шейки матки.

ВОЗ также настоятельно рекомендует обратить особое внимание:- на организацию материально-технического обеспечения и укомплектованность кадрами;- обеспечение соответствующего профессионального уровня сотрудников путем организации регулярного повышения квалификации для них и контроля качества диагностических мероприятий.

Настоящий стандарт распространяется на процедуры:- получения материала для исследования;- подготовки и доставки материала в лабораторию;- пробоподготовки;- документального оформления этих действий на каждом этапе.

2 Термины, определения и сокращения

2.1.1 аспиратор: Прибор, предназначенный для аспирации — вакуумного забора надосадочной жидкости.

2.1.2 виала: Контейнер с герметичной крышкой, содержащий транспортную жидкость, предназначенный для хранения и транспортирования клеточного материала.

2.1.3 мазок: Препарат, приготавливаемый путем нанесения и равномерного распределения (размазывания) биологического материала.

2.1.4 ПАП-тест: Данный тест является методом цервикального скрининга и используется для обнаружения потенциально предраковых и раковых процессов в шейке матки или цервикальном канале.

_______________

Система Bethesda (TBS) представляет собой систему для оценки цитологической картины материала, полученного при биопсии шейки матки, и для формирования цитологического диагноза.

Она была введена в 1988 г., и пересмотрена в 1991 и 2001 гг. Название происходит от места (Бетесда, Мэриленд) проведения конференции, на которой была утверждена к применению эта система.

2.1.5 транспортная жидкость: Специальная жидкость, использующаяся в жидкостной цитологии для сохранения и/или транспортирования материала. Как правило, представляет собой изотонический раствор с консервантами, фиксирующий и предохраняющий клетки от быстрого распада.

2.1.6 цитощетка: Щеточка для получения эндоцервикальных образцов.

2.1.7 сervex-brush: Щеточка для получения биоматериала из Т-зоны (зоны трансформации шейки матки) и влагалищной части шейки матки.

2.1.8 ID (identification): Уникальный идентификатор, который присваивается системой каждой отдельной записи или каждому пациенту.

2.2 СокращенияВ настоящем стандарте использованы следующие сокращения:аденокарцинома — АК;Всемирная организация здравоохранения — ВОЗ;жидкостная цитология — ЖЦ;

иммуноцитохимия — ИЦХ;информационная система — ИС;лабораторная информационная менеджмент-система — ЛИМС;лабораторная информационная система — ЛИС;лечебно-профилактическое учреждение — ЛПУ;

3 Получение цитологического материала

3.1 Сотрудники гинекологических и смотровых кабинетов ЛПУ, направляющие цитологический материал для исследования, должны быть информированы о том, каким методом осуществляют пробоподготовку [ЖЦ или традиционная (классическая) цитология] гинекологического материала в лаборатории, так как это влияет на выбор способа забора, хранения и транспортирования материала.

Материал для исследования следует забирать, готовить и транспортировать в лабораторию с учетом требований метода, используемого лабораторией.Материал с шейки матки забирают с помощью одноразовых щеток различного типа (см. рисунки 1-2).

Рисунок 1 — Цитощетка или щеточка цервикальная

Цитощетка должна быть со щетинками, расположенными под углом 90°. При заборе материала ее следует поворачивать на 90° не менее двух раз.

Рисунок 2 — Комбинированная щеточка, cervex-brush

Комбинированная щеточка используется для одномоментного получения материала из цервикального канала и влагалищной части ШМ. При заборе материала следует сделать пять оборотов по часовой стрелке.

При невозможности использования щеток или при использовании методов классической цитологии допустимо использование традиционных способов получения материала.

Материал с влагалищной части шейки матки допустимо забирать с помощью шпателя Эйра (см. рисунок 3), а из цервикального канала — с помощью кюретки (см. рисунок 4).

Рисунок 3 — Шпатель Эйра

При заборе делается полный оборот шпателя с легким надавливанием.

Рисунок 4 — Кюретка для получения материала цервикального канала

Использовать для забора материала ватный тампон и другие приспособления недопустимо.

3.2 Материал нужно получить со всей зоны трансформации (зоны стыка или переходной зоны). Непосредственно само получение материала для исследования с шейки матки (без учета времени на осмотр) занимает около 5 мин, процедура безболезненна и может проводиться амбулаторно.

виала для жидкостной цитологии

_______________

Зона трансформации — гистологический термин, обозначающий участок слизистой оболочки шейки матки в том месте, где многослойный плоский эпителий, характерный для влагалищной части шейки матки, переходит в цилиндрический эпителий канала шейки матки (цервикального канала).

3.3 Получение материала для исследования может быть отложено, если у женщины:- менструация;- острое воспалительное заболевание половых путей;- беременность.

Приложение Б (рекомендуемое). Журнал регистрации материала, поступающего в цитологическую лабораторию, и проведенных исследований

Сотрудник, отвечающий за этот этап работ, должен проверить соответствие представленного материала записи о нем в сопровождающем документе.

5.1 Материал, направляемый в лабораторию, сопровождается заполненным направлением на исследование (см. приложение А).

5.2 В направлении, прилагаемом к материалу, должна быть как минимум следующая информация:- фамилия, имя, отчество пациентки;- дата рождения;- номер истории болезни/амбулаторной карты/другой номер, идентифицирующий пациентку;

_______________

* Текст документа соответствует оригиналу. — Примечание изготовителя базы данных.- причина обследования (указать диагноз или, например, «профилактический осмотр», «онкопоиск»);

— дата последней менструации, продолжительность менопаузы;- количество виал с материалом и данные, какой материал в них содержится (например, соскоб с эндоцервикса, эктоцервикса), в случае штрихкодирования виал эту информацию указывают в направлении напротив каждого штрих-кода;

— дата и время сбора материала;- фамилия лица, направившего материал на исследование.При отсутствии информации для заполнения поля необходимо поставить прочерк.Наличие пустых полей в бланке направления недопустимо.

5.3 Направление может быть оформлено в электронном виде при наличии ЛИС и должно давать доступ к указанной информации в рамках прав доступа каждого конкретного медицинского работника.

5.4 Порядок сбора материала из ЛПУ для отправки в цитологическую лабораторию должен быть четко согласован между отделением ЛПУ и лабораторией и прописан в соответствующем документе.

6.1 Прием материала должен осуществлять ответственный сотрудник лаборатории, назначенный заведующим лабораторией или лицом, его замещающим, под подпись с указанием даты и времени доставки.

Порядок доставки и приема также должен быть согласован между отделением ЛПУ и лабораторией, что должно быть оформлено документально. Прием материала в лаборатории осуществляют непосредственно после его доставки.

6.1.1 Лаборатория может отказаться от приема материала в том случае, если:- отсутствует или не оформлена надлежащим образом сопровождающая документация;

— не маркирован материал;- констатируется нарушение сохранности (целостности, герметичности) упаковки;- очевидно нарушение условий сбора, хранения и/или транспортирования.

6.1.2 Отказ в приеме материала с указанием причины фиксируют в отдельном журнале и заверяют подписями представителей обеих сторон._______________Приказ Министерства здравоохранения СССР от 4 октября 1980 г.

N 1030 «Об утверждении форм первичной медицинской документации учреждений здравоохранения» (с изменениями на 31 декабря 2002 г.). Приказом Минздрава СССР от 5 октября 1988 г.

N 750 настоящий приказ был признан утратившим силу, но до утверждения новых форм продолжают применяться формы, утвержденные данным приказом — письмо Минздравсоцразвития России от 30 ноября 2009 г. N 14-6/242888.

6.1.3 Регистрацию осуществляют в ЛИМС или при отсутствии информационной системы в бумажном журнале регистрации материала (см. приложение Б).

6.1.4 Форма журнала может быть свободной, но с указанием всех параметров исследования и с наличием всех граф, имеющихся в направлении.

Приложение Д (справочное). Системы оценки цитологических препаратов

В.1 Общие требования

Приложение Д(справочное)

Таблица Д.1 — Системы оценки цитологических препаратов

Морфология

Система CIN

Папаниколау

Бетесда (1991)

Возрастная норма. Патологические изменения эпителия слизистой отсутствуют. Клеточный состав также в пределах нормы

Норма

Класс I

Негатив

Незначительные клеточные изменения

Незначительные клеточные изменения

Класс II

Доброкачественные клеточные изменения, воспаление, признаки различных инфекций, радиационные изменения, реактивные, репаративные

Плоскоклеточная атипия полиморфные изменения (воспаления, инфекции и т.п.)

Плоскоклеточная атипия полиморфные изменения (воспаления, инфекции и т.п.)

Класс II

ASCUS (АПНЗ) полиморфные изменения

Папилломавирусные изменения (койлоцитоз)

Папилломавирусные изменения (койлоцитоз)

Класс II

LSIL (Н-ПИП)

Слабая дисплазия

CIN I

Класс III

LSIL (Н-ПИП)

Дисплазия средней степени

CIN II

Класс III

HSIL (Н-ПИП)

Дисплазия высокой степени

CIN III

Класс III

HSIL (Н-ПИП)

Карцинома in situ (CIS)

CIN III

Класс IV

HSIL (Н-ПИП)

Инвазивный РШМ

Инвазивный РШМ

Класс V

Атипия клеток железистого эндоцервикального эпителия

Атипия клеток железистого эпителия, эндоцервикального эпителия

Атипия клеток железистого эпителия, эндоцервикального эпителия

Аденокарцинома

Аденокарцинома

Аденокарцинома

Аденокарцинома

Примечание — CIN (cervical intraepithelial neoplasia) — цервикальная интраэпителиальная неоплазия; ASCUS (atypical squamous cell of undetermined significance) — АПНЗ (атипия плоскоклеточная неопределенной значимости); LSIL (low-grade squamous intraepithelial lesions) — Н-ПИП (плоскоклеточное интраэпителиальное поражение низкой степени выраженности); HSIL (high-grade squamous intraepithelial lesions) — В-ПИП (плоскоклеточное интраэпителиальное поражение высокой степени выраженности).

Библиография

[1]

Руководство ВОЗ «Комплексная борьба с раком шейки матки: руководство по основам практики — 2 издание» (WHO, Comprehensive cervical cancer control: a guide to essential practice — 2nd ed)

[2]

Международная статистическая классификация болезней и проблем, связанных со здоровьем — 10-й пересмотр (International Statistical Classification of Diseases and Related Health Problems — Teath Revision — Volume 3. Alphabetical Index)

[3]

ВОЗ, Классификация опухолей женских репродуктивных органов [WHO Classification of Tumours of the Female Reproductive Organs (IARC WHO Classification of Tumours) Fourth Edition]

[4]

Цитологическая классификация Бетесда (Cytology classification. The Bethesda System 2014)

[5]

СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами»

УДК 616-006-072/-079:618.146(083.74)

ОКС 03.040, 11.040.01, 11.100.01

Ключевые слова: диагностика в онкологии, алгоритм диагностики, шейка матки, лабораторный этап

Жидкостная цитология шейки матки

Электронный текст документаподготовлен АО «Кодекс» и сверен по:официальное изданиеМ.: Стандартинформ, 2016

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Медицинский взгляд на еду
Adblock
detector