Набор реагентов ClearPrep для жидкостной цитологии

Что такое цитология шейки матки: преимущества и недостатки

Мазок Папаниколау (другое название цитологии из шейки матки) является самым распространенным тестом для выявления рака на самых ранних стадиях. Благодаря такому простому исследованию, специалисты обнаруживают клеточные изменения задолго до проявления первых симптомов болезни.

Преимущества ПАП-теста по сравнению с биопсией тканей:

  • Легкость забора образца;
  • Практически полное отсутствие болезненных ощущений у пациента;
  • Отсутствие риска серьезных осложнений после самой процедуры;
  • Низкая стоимость.

К недостаткам можно отнести лишь то, что в некоторых случаях биопсия тканей показывает более точные и расширенные результаты, нежели цитология.

Новые возможности ранней диагностики и профилактики ВПЧ-ассоциированных поражений шейки матки

Ранняя диагностика рака шейки матки методом жидкостной цитологии

Ключевые слова: рак шейки матки, жидкостная цитология, скрининг

cervical cancer, liquid-based cytology, screening

Казаишвили Т.Н.

ГБУЗ «Центр специализированных видов медицинской помощи имени В.П. Аваева» (Тверь, Россия) 170006, Россия, Тверская область, Тверь, ул. Софьи Перовской, 56 E-mail: tkaza@bk.ru

Early diagnosis of cervical cancer by liquid-based cytology

Kazaishvili T.N.

SBOH «V. Avaev Center of specialized types of medical care» (Tver, Russia) 56, ul. Sofii Perovskoy, Tver, Tverskaya oblast, 170006, Russia E-mail: tkaza@bk.ru

Резюме

Рак шейки матки – одна из наиболее распространенных онкологических патологий.

В этой статье мы сравнили два метода цитологического исследования: традиционную и жидкостную цитологию.

Метод жидкостной цитологии является более информативным и может использоваться как самостоятельный скрининговый метод выявления заболеваний шейки матки.

Abstract

Uterus cervix cancer is one of the most widespread oncological pathologies among the female population.

In this article we compared two methods of cytologic research of material from a uterus cervix: traditional and liquid cytology.

Рак шейки матки (РШМ) занимает второе место в структуре онкологической патологии среди женского населения в мире. Ежегодно регистрируется около 500 тыс. новых случаев рака шейки матки и около 250 тыс. смертельных исходов.

За последние 10 лет заболеваемость раком шейки матки в России возросла на 26%. Показатель запущенности в 2013 г. составил 36%, то есть больше трети больных обращаются уже на III, IV стадиях, когда лечение неэффективно.

Одногодичная летальность от рака шейки матки составляет 16%.

Несмотря на визуальность формы и длительный период предрака с возможностью ранней диагностики и высокоэффективного несложного органосохраняюще-го лечения, заболевание часто диагностируется на этапе глубоко инвазивного процесса, предполагающего калечащее лечение без гарантий выздоровления.

Это свидетельствует об объективных нераскрытых трудностях диагностики, приводящих к расхождениям результатов диагностических тестов, их невысокой чувствительности и воспроизводимости.

Для максимальной оптимизации диагностики цер-викальной патологии и избежания субъективной интра-операционной оценки локализации и размеров участка неоплазии необходимо применение современных и внедрение новых уточняющих методов диагностики.

В настоящее время все большее распространение получает высокоэффективный метод жидкостной цитологии, который позволяет получить тонкий репрезентативный моно-слойный препарат с минимальным содержанием крови, бактерий и нейтрофильных лейкоцитов.

Влажная фиксация усиливает четкость структур, распространенные артефакты при этом отсутствуют.

онкогенной направленности от воспалительной. Чувствительность цитологического метода при применении ЖЦ возрастает до 85% и до 96% в отдельных лабораториях.

Цель исследования – совершенствование диагностики доброкачественных, предраковых заболеваний и рака шейки матки, сопоставление традиционной и жидкостной цитологии в диагностике цервикальной патологии.

За период с 2014 по 2015 гг. на базе ГБУЗ Центра им. В. П. Аваева г.

Твери было проведено 4560 исследований цервикальных образцов, параллельно традиционным методом и методом жидкостной цитологии с приготовлением и окраской цитологического препарата по методике BD Surepath c автоматизированной системой просмотра цитологических препаратов BD Focal Point GS.

Возраст пациенток составил от 18 до 65 лет. Интерпретация цитологической картины производилась согласно общепринятым критериям оценки состояния эпителия по Bethesda System,1999.

Таким образом, точность метода жидкостной цитологии существенно выше по сравнению с традиционным

методом. Метод жидкостной цитологии в скрининге рака шейки матки продемонстрировал возможность выявления патологического процесса на ранних этапах его развития, проведения мониторинга опухолевого процесса,

что определяет своевременность применения правильной тактики лечения. ЖЦ может использоваться как самостоятельный высокоинформативный скрининговый метод выявления заболеваний шейки матки.

Список литературы

2. Новик В. И. Эпидемиология рака шейки матки, факторы риска, скрининг. Практическая онкология. 2002; 3: 156-166.

3. Онкология: национальное руководство. Под ред. Чиссова В. И., Давыдова М. И. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008.

ГАЛАВИТ – иммуномодулятор с доказанным противовоспалительным действием

Подробно о Галавит для врачей

«Медицинский совет. Генекология» 2015

В.Н. Прилепская, д.м.н., профессор, Г.Р. Байрамова, д.м.н., Е.А. Коган, д.м.н., профессор, В.Ф. Чернова, А.Н. Окушко, к.м.н. Научный Центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова Минздрава России, Москва

В данном обзоре рассматривается взаимосвязь вируса папилломы человека и его роль в развитии цервикальных интраэпителиальных неоплазий (CIN) и рака шейки матки.

Представлены данные о наиболее информативных методах диагностики (иммуногистохимические, молекулярно-генетические и др.

) и лечения ВПЧ-ассоциированных поражений шейки матки.

В России в 2012 г. число новых случаев РШМ составило 15 342 (6,3%), смертность от рака шейки матки – 7 371 (5,3%) случаев [1]. В последние годы РШМ все чаще встречается в молодом возрасте.

По данным ВОЗ, заболеваемость РШМ в возрастной группе 15-39 лет в мире составила 111 503 случая, в России – 3 954, в группе 40-44 года – 66 308 и 1 564 случая соответственно [1].

По данным ряда исследований, РШМ у женщин в возрасте 30-39 лет составляет 78%, в возрасте 20-29 лет – 21% и только в 1% случаев диагностирован в возрасте моложе 20 лет [3].

Почти в 100% случаев у больных РШМ, подтвержденным гистологическим методом исследования, выявляется вирус папилломы человека (ВПЧ) высокоонкогенных типов.

По данным C.M. Wheeler и соавт. (2006) через 3 года после инфицирования ВПЧ CIN II-III развивается у каждой четвертой женщины (27%) [5]. В России папилломавирусная инфекция диагностируется у 15,5% женщин, в США – у 28,6%, в Европе – 2-12% [6].

Вирус папилломы человека – ДНК-содержащий вирус, в состав которого входят два структурных гена (L1 и L2) и семь функциональных генов (E17). Известно более 200 типов ВПЧ, более 40 из них способны поражать слизистые оболочки половых органов [7].

(2015) [8] показали, что у женщин с гистологически верифицированным диагнозом CIN 3 в 63,6% случаев выявляется ВПЧ 16 типа, в 7% – ВПЧ 33 типа, в 6,2% случаев – ВПЧ 18 типа и в 5,4% – ВПЧ 31 типа.

Вместе с тем авторы показали, что ВПЧ 16 типа чаще встречается в возрасте до 35 лет [8]. В ряде исследований показано, что в 70% случаев инвазивный РШМ обусловлен ВПЧ 16 и 18 типов [9].

Эпидемиологические и молекулярно-биологические данные указывают на важную роль вируса папилломы человека в возникновении цервикальных интраэпителиальных неоплазий и рака шейки матки. Почти в 100% случаев у больных РШМ, подтвержденным гистологическим методом исследования, выявляется вирус папилломы человека высокоонкогенных типов

Особенностью ВПЧ-инфекции является тот факт, что в силу эпителиотропности вируса он не обнаруживается в крови, а выработка антител иммунной системой отмечается далеко не у всех инфицированных больных [10].

При этом уровень антител очень низок и не способен обеспечить длительный и надежный иммунитет.

Приложение Г (рекомендуемое). Перечень и краткая характеристика необходимого оборудования и расходных материалов, применяемых при использовании метода жидкостной цитологии

Настоящий стандарт разработан как руководство по организации и проведению диагностических мероприятий, в том числе с использованием метода жидкостной цитологии, для руководителей лечебно-профилактических учреждений, гинекологических отделений, женских консультаций, лабораторий, врачей-гинекологов, сотрудников женских консультаций, смотровых кабинетов, цитологических лабораторий.

Настоящий стандарт разработан в соответствии с настоятельными рекомендациями ВОЗ о мероприятиях по борьбе с онкологическими заболеваниями шейки матки.

ВОЗ также настоятельно рекомендует обратить особое внимание:- на организацию материально-технического обеспечения и укомплектованность кадрами;- обеспечение соответствующего профессионального уровня сотрудников путем организации регулярного повышения квалификации для них и контроля качества диагностических мероприятий.

Настоящий стандарт распространяется на процедуры:- получения материала для исследования;- подготовки и доставки материала в лабораторию;- пробоподготовки;- документального оформления этих действий на каждом этапе.

Приложение Г(рекомендуемое)

Г.1 Техническое оснащение лаборатории для проведения метода ЖЦ:- центрифуга лабораторная с качающимся ротором, приспособленным для центрифугирования пробирок диаметром 17 мм, объемом 15 мл, способная обеспечить центрифугирование 600 g;

— «вортекс» для пробирок с плавной регулировкой скорости встряхивания от 100 до 3000 rpm;- прибор для автоматического приготовления клеточной суспензии, выполняющий начальный процесс обогащения клеточной суспензии (состоящий в очистке суспензии от эритроцитов, детрита и элементов воспаления): перемешивание образца и его извлечение из пробирки с консервантом, затем нанесение образца на плотный реагент в пробирку для центрифугирования;

— аппарат для автоматической окраски препаратов — прибор для окрашивания образцов или эквивалент, который предназначается для обработки микропрепаратов, автоматического переноса клеточных образцов из пробирок для центрифугирования в осадочную камеру, помещаемую на предметное стекло для микроскопа, автоматически окрашивает и промывает каждый микропрепарат;

— рабочая станция для управления прибором или эквивалент: системный блок с предустановленным программным обеспечением, монитор, клавиатура, мышь;- аспиратор — система создания вакуума для удаления продуктов окрашивания: емкость, компрессор, комплект трубок не менее одного комплекта;- считыватель штрих-кода.

Г.2 Расходные материалы:- одноразовые пробирки из пластика диаметром 17 мм, вместимостью до 15 мл, с закручивающейся крышкой, выдерживающие центрифугирование при скорости 600 g;

— одноразовые стерильные виалы с транспортной средой;- одноразовые стерильные цитологические щетки для забора материала с влагалищной части шейки матки;

— одноразовые стерильные цитологические щетки для забора материала из цервикального канала;- предметные стекла для микроскопии с адгезивным покрытием (например, D-полилизиновым) или без оного — в зависимости от конкретной методики;

— набор одноразовых пастеровских пипеток для работы с жидкостью и клеточным осадком;- при необходимости — пленка или покровные стекла для покрытия препаратов;

— консервирующая (транспортная) жидкость;- красители, буферы, забуференная или дистиллированная вода, фиксаторы и спецрастворы в зависимости от способа окраски;

— одноразовые наконечники для переноса и дозирования материала;- средство для промывания аппарата для автоматической окраски препаратов;- контейнер для сбора и утилизации отходов класса B.

Показания к проведению теста Папаниколау

Цитологическое исследование проводится всем женщинам в возрасте от 18 до 30 лет раз в год. Пациенткам в возрасте 30 до 65 лет ПАП-тест проводится раз в 3-4 года.

Другими показаниями к проведению ПАП-теста (иногда даже в ежегодном порядке) являются:

  • Постоянная смена сексуальных партнеров;
  • ВПЧ-инфекция, ЗППП в анамнезе;
  • Начало половой жизни в очень раннем возрасте;
  • Ослабленная иммунная система (например, после химио или радиотерапии);
  • Курение;
  • Наличие в семейной истории болезни раковых заболеваний.

Если женщина игнорировала походы к гинекологу долгие годы, то мазок может быть проведен уже во время беременности. Это несет определенную угрозу вынашиванию плода, поэтому стоит сдать все стандартные анализы за 2-3 месяца до планируемого зачатия.

Диагностическая жидкостная цитология проводится не у каждой женщины. Врач-гинеколог рекомендует ее для ряда пациенток с особыми показаниями:

  1. Женщина жалуется на выделения из половых органов, которые носят нетипичный характер. Выделения увеличиваются в объеме после сексуального контакта, что может пугать пациенток и вызывать серьезные опасения.
  2. Гинеколог в ходе мануального осмотра установил эрозию шейки матки. Ситуация усугубляется при гистологическом обнаружении аномальных клеток. Исследование помогает подтвердить или опровергнуть онкопатологию или предраковое состояние. Показана процедура женщинам, у которых имеется генетическая предрасположенность к раку шейки матки, то есть представительницы прекрасного пола в роду болели или умирали от данной болезни.
  3. Менструальный цикл женщины стал нерегулярным: месячные стали болезненными, изменился объем менструальной крови, промежутки между кровотечениями стали длиннее или короче. Месячные могут отсутствовать продолжительное время.
  4. При прегравидарной подготовке женщины с целью диагностики венерических и других видов заболеваний. Показывает жидкостная цитология и некоторые причины бесплодия, привычного невынашивания или других репродуктивных расстройств.
  5. При вирусной инфекции половых путей или генерализованных форм. Вич-инфекция также является показанием к цитологии шейки матки. Иммунодефицит как побочное явление может быть обусловлен гормонотерапией, при которой показана жидкостная цитология.
  6. В менопаузу женщинам также полезно обследоваться с помощью данного метода во избежание появления хронических латентно протекающих заболеваний.

Если врач установил для женщины одно из показаний, то к диагностическому методу прибегают не реже 1 раза в год. При усугублении состояния пациентки исследование можно проводить чаще, не опасаясь за состояние половых органов и общий уровень здоровья.

Новые возможности ранней диагностики и профилактики ВПЧ-ассоциированных поражений шейки матки

Для ранней диагностики CIN широко применяют цитологический метод Pap-тест и молекулярные методы выявления ДНК ВПЧ [15, 42].

Во многих странах с целью ранней диагностики и снижения заболеваемости РШМ разработаны скрининговые программы, включающие рутинное проведение цитологического метода исследования Pap-тест (тест по Папаниколау).

В настоящее время в странах Европы и США цитологическое исследование рекомендовано проводить 1 раз в 3 года, начиная с возраста 21 год или спустя 3 года от начала половой жизни [16].

2012 №572н регламентированы лишь общие положения о целесообразности проведения ежегодных профилактических осмотров женщин с цитологическим исследованием мазков с экзо- и эндоцервикса.

Диагностика ВПЧ-ассоциированных заболеваний шейки матки должна быть комплексной и базироваться на проведении ряда исследований: выявление ДНК ВПЧ с помощью реакции гибридизации вирусной ДНК с РНК-зондом (Digene-тест, Cobas HPV Test), выявление ДНК ВПЧ с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с типированием и определением количества геномных эквивалентов вируса;

цитологическое исследование (традиционная или жидкостная); определение онкопротеинов Е6 и Е7; оценка экспрессии онкопротеинов p16/Ki67 иммуноцитохимическим (ИЦХ), иммуногистохимическим (ИГХ) методами;

Однако на сегодняшний день данные о специфичности и чувствительности всех перечисленных методов неоднозначны.

Другим международным референтным тестом, который также используется для генотипирования ВПЧ, является тест-система Cobas.

Данный метод обеспечивает качественную детекцию 14 высокоонкогенных типов ВПЧ: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68, а также генотипирование ВПЧ 16 и 18 типов в этом же анализе [17]. S. Phillips и соавт.

(2015) провели сравнительный анализ ВПЧ-тестирования 407 образцов с гистологически подтвержденным диагнозом CIN различной степени тяжести на тест-системах Cobas и Digene.

Показана корреляция между степенью тяжести плоскоклеточных интраэпителиальных поражений и наличием ВПЧ высокоонкогенных типов – чувствительность тест-системы Cobas составила 90,6%, Digene-теста – 86,1%, специфичность – 92,9 и 91,8 соответственно [18].

Особенностью ВПЧ-инфекции является тот факт, что в силу эпителиотропности вируса он не обнаруживается в крови, а выработка антител иммунной системой отмечается далеко не у всех инфицированных больных. При этом уровень антител очень низок и не способен обеспечить длительный и надежный иммунитет

В нашей стране также используется метод ПЦР диагностики в режиме реального времени, который позволяет провести генотипирование и количественное определение 21 типа ВПЧ (HPV КВАНТ – 21) – 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 44, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82, 6, 11.

Метод основан на реакции амплификации, в ходе которой молекулы праймеров связываются с фрагментами ДНК вируса в образце и в среде с добавлением катализаторов, под воздействием температуры происходит образование дочерних комплементарных двухцепочечных молекул ДНК.

По данным ряда авторов, для определения дисплазии высокой степени и РШМ необходимо проводить цитологическое исследование в сочетании с тестированием на ВПЧ, чувствительность достигает более 96% [20].

В последние годы помимо традиционной цитологии активно внедряется жидкостная цитология (ЖЦ) – высокоспецифичный метод.

Известно, что пусковым моментом неопластического процесса шейки матки является интеграция ВПЧ в геном клетки-хозяина, в ходе которого нарушается считывание генов Е1 и Е2, регулирующих экспрессию онкопротеинов Е6 и Е7.

Экспрессия специфических онкобелков Е6 и Е7 является необходимым условием злокачественного роста цервикальных клеток.

Установлено, что гены Е6 вызывают деградацию белков-супрессоров генов р53 и ВАХ, предотвращают апоптоз и деградацию тирозин-киназы, активацию теломеразы и подавляют выработку интерферона [24].

Исследования ряда авторов показали, что обнаружение м-РНК, кодирующих онкопротеины Е6 и Е7 вируса папилломы человека высокого онкогенного риска, является более специфическим предиктором персистирующей инфекции, чем обнаружение ДНК ВПЧ [26, 27].

По данным F. Karlsen (2009), специфичность показателей онкопротеинов Е6 и Е7 для LSIL (низкая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения) составляет 80% [28].

Чувствительность кольпоскопии для определения субклинической ПВИ, предрака и рака шейки матки составляет 80-90%, специфичность 30-60%. К преимуществам данного метода можно отнести возможность прицельной биопсии с наиболее подозрительных участков шейки матки для дальнейшего гистологического исследования с целью подтверждения или опровержения неопластического процесса

В последние годы одним из перспективных методов диагностики ВПЧ-ассоциированных поражений шейки матки является определение экспрессии маркеров пролиферации р16 и Ki 67, которые в свою очередь позволяют определить не только наличие вирусных белков в клетке, но и степень нарушений клеточной регуляции в ответ на персистенцию вируса в клетке.

Известно, что белок р16 (INK4A) [30, 43] является продуктом гена CDKN2A и подавляет активность циклин-зависимых киназ 4 и 6, которые регулируют G1-фазу клеточного цикла.

Экспрессия этого белка в нормальных клетках ограничена, однако при ВПЧ-инфекции онкобелок Е7 связывается с белком супрессором опухолей ретинобластомой (RB), что приводит к деградации последней и, как следствие, к избыточной экспрессии р16 [25].

Выявление атипичных клеток плоского эпителия шейки матки, экспрессирующих одновременно р16 и маркер пролиферации Ki67, указывает на индуцированное дисрегулирование клеточного цикла и обеспечивает более точную диагностику поражений высокой степени тяжести.

Первые исследования по определению р16 и Ki67 показали высокую специфичность метода [31]. H. Ikenberg и соавт. (2013) провели обследование 27 349 женщин из 196 медицинских центров в возрасте от 18 до 65 лет (средний возраст 39,9±11,4 года), которым был проведен цитологический скрининг, ВПЧ-тест и определение экспрессии р16 и Ki67 иммуно-гистохимическим методом.

Пациенткам с аномальными цитологическими мазками и/или положительным ВПЧ-тестом, и/или положительной экспрессией р16 и Ki67 выполнялась расширенная кольпоскопия (n=2301) и прицельная биопсия шейки матки (по показаниям).

Диагноз CIN2 был установлен в 205 биоптатах шейки матки. При этом окраска цитологических препаратов двойным иммуноцитохимическим методом показала наибольшую чувствительность по сравнению с мазком, окрашенным гематоксилин-эозином – 86 и 68,5% соответственно (р

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Медицинский взгляд на еду
Adblock
detector